目的 建立一种TaqMan real-time PCR探针杂交法,用于快速检测人rs12979860位点多态性.方法 从人各不同组织器官中提取基因组DNA,利用小沟结合蛋白(MGB)探针的高度特异性,设计相应的引物探针,根据实时荧光定量PCR过程中产生的信号在2个检测通道的强弱变化来鉴别等位基因差异.最后所测样本经DNA测序验证结果的准确性.采用x2检验进行统计分析.结果 利用TaqMan MGB蛋白作为探针,能够区分只有1个碱基差异的目标基因组片段.该方法最低检测浓度为1.5 ng/μl,扩增有效率达97.6％.不同组织器官(肾、心脏、子宫、血浆)及分泌物(鼻咽部)的DNA均可以用于检测.在随后对40例高加索人和50例黄种人的检测中亦证实,rs12979860位点的基因型及等位基因频率存在差异,高加索人以CT基因型为主(26/40),而黄种人以CC基因型为主(40/50),差异有统计学意义(x2=18.75,P＜0.05).在两种族人群中,抗病毒治疗血清学转换与患者基因型之间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 TaqMan MGB法能快速并准确地区分rs12979860位点多态性,具有高度特异性和灵敏度,适用于多种样本的临床检测,是对丙肝患者抗病毒个体化治疗进行遗传分析的理想工具.
作者：王娟；Bergqvist Anders；苏明权；郝晓柯；马越云
来源：中华检验医学杂志 2013 年 36卷 8期
