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目的 运用噬菌体展示技术,对结核分枝杆菌PPE17蛋白特异性结合肽进行了初步筛选.方法 从结核分枝杆菌基因组中扩增PPE17基因,克隆到pET28a中,在大肠杆菌BL21中表达,Ni2+柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定.将纯化的PPE17蛋白包被到ELISA板中,用噬菌体7肽库进行筛选,经4轮淘选后,随机选取噬菌斑进行测序,并用DNAMAN对阳性克隆所编码的多肽氨基酸序列进行分析比较.结果 成功构建并表达了PPE17抗原,获得分子量约为37 kD的可溶性蛋白.从第4轮的洗脱物中,随机挑选20个噬菌斑.测序结果可翻译成8种多肽分子,其中重复6次的多肽序列为LKWGHVY.结论 通过噬菌体展示技术筛选到PPE17蛋白的特异性结合肽,有望成为鉴定该抗原的小分子诊断制剂.
作者：周菁；任易；陈军；陈丽峰
来源：公共卫生与预防医学 2020 年 31卷 5期
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