目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)分泌蛋白Rv0674,筛选与Rv0674蛋白特异性结合的肽分子.方法 用PCR从MTB(H37Rv)基因组中扩增出Rv0674基因.克隆到pEASY-E1表达载体上,将测序验证正确的重组表达质粒转化入E.coli BL21中,用IPTG诱导蛋白表达,Ni2+亲和层析法纯化目的蛋白.通过SDS-PAGE和Western blot鉴定后,将纯化后的Rv0674蛋白包被到96孔板上,再利用噬菌体展示技术,经过连续4轮特异性亲和筛选,对第4轮产物随机挑取单独的噬菌斑,提取基因组并测序,用SnapGene 4.1.4比对并翻译多肽的基因序列.结果 构建了Rv0674序列正确的重组表达质粒,获得分子量约为26.5kD的可溶性Rv0674蛋白.从第4轮的洗脱物中,随机挑选40个噬菌斑.测序结果可翻译成10种多肽分子,其中重复19次的多肽序列为TSTMMMHMNL.结论 通过噬菌体展示技术筛选到TSTMMMHMNL多肽序列,对Rv0674蛋白的亲和力和特异性最好.
作者：董利军；梁忠喆；刘通；王大军；王琦；杨延辉
来源：宁夏医科大学学报 2019 年 41卷 6期
