目的：建立 TaqMan 荧光定量 PCR 方法定量检测新型隐球菌基因组 DNA ，为检测隐球菌性脑膜炎提供重要方法。方法在国家生物技术信息中心（NCBI）查找新型隐球菌各亚型的 ITS‐rDNA 序列，序列比对后设计特异性引物和探针，扩增片段为114 bp ，构建质粒标准品，调整质粒浓度为1．42×108 copy／μL ～1．42×10 copy／μL 共8个浓度梯度，分别取2μL 作为模板，优化反应条件，建立标准曲线，进行敏感性、特异性、重复性评价，并检测临床确诊的15例隐球菌脑膜炎感染菌株。结果建立的荧光定量 PCR 可以检测2．84×102拷贝的质粒 DNA ，对临床分离的各10例其他真菌、细菌、乙型肝炎病毒 DNA 和人类基因组 DNA 均无扩增曲线，重复性良好，3个浓度的批间变异系数分别为2．86％、1．48％、1．36％，可准确检测15例新型隐球菌。结论成功建立检测新型隐球菌的荧光定量 PCR 方法，敏感性和特异性较高，结果稳定可靠，可早期、快速诊断隐球菌性脑膜炎。
作者：韩慧；黄福达；张秀明；吴炳义
来源：国际检验医学杂志 2016 年 37卷 19期
