目的:构建并制备表达人CD137L蛋白的5型重组腺病毒（Ad5-CD137L），并初步研究其在小鼠中的抗肿瘤免疫效果。方法:将密码子优化CD137L蛋白的表达基因插入pDC316穿梭质粒,并与pBH-GloxΔE1,3Cre腺病毒骨架质粒，共同转染HEK293细胞，构建Ad5-CD137L种子。扩增并纯化后，对所得Ad5-CD137L重组腺病毒的插入目的基因与蛋白表达情况进行鉴定。检测Ad5-CD137L在C57BL/6小鼠体内的特异性细胞免疫和抗肿瘤免疫水平。结果:成功地构建了Ad5-CD137L，PCR和测序结果表明插入目的基因与构建理论值相符。免疫荧光法鉴定Ad5-CD137L能在HEK293细胞中表达目的蛋白，经Western印迹法鉴定该目的蛋白的相对分子质量约为25 000，与理论值相符。与空腺病毒相比，Ad5-CD137L能显著诱导小鼠特异性IFN-γ（
t=6.315，
P=0.003），抗肿瘤免疫效果更显著（
t21 d=8.275，
t29 d=4.492；
t39 d=5.101，
P均<0.001）。
结论:成功构建了Ad5-CD137L，该重组病毒具有特异性细胞免疫原性和抗肿瘤免疫效果。
作者：吴洁；张柯欣；安彤；李思奇；朱赟；陈刚；庄昉成；高孟
来源：国际流行病学传染病学杂志 2022 年 49卷 4期
