目的:分析游离二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)粉尘刺激的RAW264.7巨噬细胞源性外泌体miRNA的表达差异.方法:以SiO2(200 mg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞48 h(exo_48 h组)后收集上清液,超速离心法提取上清中的外泌体;使用透射电镜扫描、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术、蛋白质印迹法鉴定外泌体;提取外泌体miRNA行高通量测序,比较exo_control组(以不含SiO2粉尘的培养基孵育RAW264.7巨噬细胞48 h)与exo_48 h组外泌体miRNA表达差异;采用miRanda,TargetScan和starBase 3个软件进行差异miRNA的靶基因预测,对靶基因进行GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,进一步分析基因的生物学功能.结果:在透射电镜下,外泌体为不均匀分布的、圆形或椭圆形的、脂质膜包被的、直径30～100 nm的囊泡;粒径检测显示其体积峰度集中在40～100 nm;蛋白质印迹法显示外泌体标志蛋白质TSG101表达阳性.高通量测序筛选出148个差异表达的外泌体miRNA.与exo_control组相比,exo_48 h组miR-219c-3p,let-7d-3p,let-7a-1-3p,miR-328-3p,miR-365-3p,miR-7219-3p等显著上调,miR-378d和miR-5106等显著下调.靶基因预测结果、GO和KEGG分析结果显示靶基因主要富集在mTOR信号通路、Wnt信号通

作者：王蕾；覃小峰；陈慧萍；林晓芳；陈慧；蒋海鹰；胡永斌

来源：中南大学学报（医学版） 2019 年 44卷 10期