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目的:筛选获得一种高亲和力的能特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.方法:体外合成全长88 nt的单链DNA文库,通过反复的SELEX筛选获得特异性结合Anip973细胞的单链DNA适配子,并通过生物素-辣根过氧化物酶-链霉亲和素系统初步测定筛选的适配子与细胞的亲和力,将结合力最高的适配子库进一步克隆测序.结果:经过11轮的正向筛选,以及7轮低转移性肺癌细胞AGZY83-a的反筛后,筛选获得了与Anip973细胞具有极高亲和力的适配子,亲和力从第1轮的0.08±0.02上升至0.98±0.28;将亲和力最高的第11轮适配子库进行克隆测序,将亲和力最高的适配子标记荧光素通过流式细胞术进一步验证发现筛选的ssD-NA具有很强的特异性.结论:成功筛选获得了亲和力高的特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.

作者:李金明;章志怀;彭振元

来源:武汉大学学报(医学版) 2011 年 32卷 3期

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作者:
李金明;章志怀;彭振元
来源:
武汉大学学报(医学版) 2011 年 32卷 3期
标签:
SELEX技术 肺癌细胞 DNA适配子
目的:筛选获得一种高亲和力的能特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.方法:体外合成全长88 nt的单链DNA文库,通过反复的SELEX筛选获得特异性结合Anip973细胞的单链DNA适配子,并通过生物素-辣根过氧化物酶-链霉亲和素系统初步测定筛选的适配子与细胞的亲和力,将结合力最高的适配子库进一步克隆测序.结果:经过11轮的正向筛选,以及7轮低转移性肺癌细胞AGZY83-a的反筛后,筛选获得了与Anip973细胞具有极高亲和力的适配子,亲和力从第1轮的0.08±0.02上升至0.98±0.28;将亲和力最高的第11轮适配子库进行克隆测序,将亲和力最高的适配子标记荧光素通过流式细胞术进一步验证发现筛选的ssD-NA具有很强的特异性.结论:成功筛选获得了亲和力高的特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.

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