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目的 应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer).方法 体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序.最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验.结果 经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至o.86,提高了约5倍.特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性.结论 经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础.

作者:陈孜;徐又佳;李光飞;张鹏;沈光思

来源:西安交通大学学报(医学版) 2014 年 35卷 5期

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作者:
陈孜;徐又佳;李光飞;张鹏;沈光思
来源:
西安交通大学学报(医学版) 2014 年 35卷 5期
标签:
SELEX技术 骨肉瘤 HER2 DNA适配体 SELEX technology osteosarcoma HER2 DNA aptamer
目的 应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer).方法 体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序.最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验.结果 经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至o.86,提高了约5倍.特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性.结论 经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础.

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