目的:建立稳定表达微小RNA 124-5p(miR-124-5p)的宫颈癌细胞系,探讨miR-124-5p对宫颈癌细胞增殖和肿瘤恶化程度的影响.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)扩增miR-124-5p的前体序列,将其克隆至mpCDH-CMV-MCS-EF1-tRFP(简称为mpCDH)载体中,构建重组质粒mpCDH-miR-124-5p.通过慢病毒包装系统将目的质粒mpC-DH-miR-124-5p或空载体mpCDH与包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染入人胚肾上皮细胞(293 T细胞),收集病毒液分别感染宫颈癌HeLa和SiHa细胞系.观察48 h后红色荧光蛋白(RFP)阳性细胞的比例.进一步采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染后宫颈癌细胞中miR-124-5p的表达水平,运用虫荧光素酶报告实验验证miR-124-5p的活性.通过平板克隆实验和软琼脂集落形成实验观察miR-124-5p对宫颈癌细胞增殖能力和肿瘤恶化程度的影响.结果:成功构建重组质粒mpCDH-miR-124-5p.重组miR-124-5p慢病毒感染宫颈癌细胞系后细胞状态良好,且荧光率高达90
作者：徐静云；丁祥亚；卢春
来源：江苏大学学报（医学版） 2017 年 27卷 1期
