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灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌.但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系.本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体pSB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80％.通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3-4μg pSB130NG-LZ8+107个原生质体.转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达.
作者：孙墨可；张曼；田娟；李晓薇；李海燕；李玉
来源：菌物学报 2017 年 36卷 12期
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