目的克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,表达并纯化基因重组SEB,并对其进行活性研究.方法采用PCR技术从金黄色葡萄球菌染色体DNA上扩增得到SEB基因,克隆到原核表达载体pET22b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,全自动测序仪测序.IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,用HiTrapTM chelating HP柱纯化重组表达的SEB,通过ELISA实验检验重组SEB的抗原性.用脂多糖和放线菌素D致敏小鼠模型检测重组SEB的毒性.结果所克隆的SEB基因核苷酸序列与报道的序列完全相同.表达的SEB在SDS-PAGE图谱的位置与预期相符,得到了SDS-PAGE电泳纯的基因重组SEB.ELISA试验结果表明,纯化的重组SEB与抗野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应.小鼠致死性试验表明,重组SEB与野生型SEB具有相同的毒性.结论在大肠杆菌中成功克隆及表达了金黄色葡萄球菌肠毒素B,为进一步分析SEB分子中相关活性位点及研究SEB发病机制打下了基础.
作者：宋云扬；王惠芳；李艳军；高川；张靖；张金平；吴方晖
来源：免疫学杂志 2006 年 22卷 3期
