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目的构建分泌性表达白介素(IL)-2的重组卡介苗(BCG).方法分别以BCG和IL-2 cDNA为模板,通过PCR扩增得到约117 bp的BCG抗原85B(BCG-Ag85B)信号肽序列和399 bp的IL-2基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列克隆至大肠杆菌-BCG穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS.再将IL-2基因克隆至pMS中,得到重组质粒pMSIL-2.结果质粒pMSIL-2经双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和IL-2正确插入载体pMV261.结论重组质粒pMSIL-2可望在BCG中分泌性表达细胞因子IL-2,该质粒的构建成功为改造BCG、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础.

作者:刘海涛;孙晓文;李博;鲁军;朱江;凡杰;夏术阶

来源:上海医学 2004 年 27卷 5期

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作者:
刘海涛;孙晓文;李博;鲁军;朱江;凡杰;夏术阶
来源:
上海医学 2004 年 27卷 5期
标签:
卡介苗 白介素-2 重组穿梭质粒 PCR扩增
目的构建分泌性表达白介素(IL)-2的重组卡介苗(BCG).方法分别以BCG和IL-2 cDNA为模板,通过PCR扩增得到约117 bp的BCG抗原85B(BCG-Ag85B)信号肽序列和399 bp的IL-2基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列克隆至大肠杆菌-BCG穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMS.再将IL-2基因克隆至pMS中,得到重组质粒pMSIL-2.结果质粒pMSIL-2经双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B信号肽和IL-2正确插入载体pMV261.结论重组质粒pMSIL-2可望在BCG中分泌性表达细胞因子IL-2,该质粒的构建成功为改造BCG、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础.

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