目的:构建含SNP位点的血管内皮生长因子(VEGF)基因YUTR的荧光素酶报告基因载体,为进一步揭示VEGF基因3'UTR的单核苷酸多态性(SNP)影响肺癌发病风险的分子机制奠定基础.方法:以rs3025039和rs3025040两个位点均为C纯合子的非癌症病人血液DNA为模板,扩增出两位点为C/C单体型、长度为1448 bp的VEGF基因3'UTR目的片段,测序验证后将其克隆至pMIR-REPORT荧光素酶报告基因载体上,得到重组质粒pMIR-C/C.同时,我们以pMIR-C/C为模板定点突变两个SNP 位点,得到具有T/T单体型的重组质粒pMIR-T/T.将各重组质粒转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性克隆后提取质粒进行双酶切鉴定及DNA测序鉴定.结果:单菌落质粒测序验证显示带有C/C单体型的VEGF基因3UTR重组质粒pMIR-C/C构建成功；经两次定点突变,成功将pMIR-C/C质粒转变为pMIR-T/T,经测序验证未引入任何其他突变.同时生物信息学预测还显示rs3025040位点位于miR-199a/b与VEGF基因nRNA的结合位置,其改变可以影响miRNA与mRNA的结合效率.结论:本研究成功构建了含有两个连锁SNP的VEGF基因3'UTR的荧光素酶报告基因载体,为今后VEGF基因3'UTR的功能研究奠定基础.
作者：汪玉洁；白云；薛兴阳；金磊；王颖；王升跃
来源：现代生物医学进展 2012 年 12卷 6期
