为利用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovarian,CHO)细胞表达系统制备重组猪干扰素-γ(recombinant porcine interferon gamma,rPoIFN-γ),并分析其体外抗病毒活性,本研究首先构建rPoIFN-γ真核表达质粒 pcDNA3.1-PoIFN-γ,转染悬浮培养的 CHO细胞,进行上清分泌表达,利用亲和层析纯化目的蛋白,并进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 鉴定;通过 CCK-8 实验分析rPoIFN-γ对细胞的毒性,用VSV/PK-15 系统检测其抗病毒活性效价;最后分析rPoIFN-γ对塞内卡病毒A(Seneca virus A,SVA)的抗病毒活性及其对细胞内干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)和细胞因子的诱导作用.结果显示,本研究利用 CHO 悬浮细胞表达系统成功制备了纯化的rPoIFN-γ,该rPoIFN-γ对细胞无毒性,VSV/PK-15 系统检测其活性效价为 5.59×107 U/mg;此外,rPoIFN-γ 可诱导细胞内多种 ISGs 和细胞因子的表达,并显著抑制 SVA 的复制.总之,本研究成功利用 CHO表达系统制备了高活性的 rPoIFN-γ,并在体外完成其对 SVA的抗病毒作用分析,为rPoIFN-γ的功能及抗病毒制剂的研究提供了实验材料和基础.
作者：王凌云；郝荣增；杨洋；李亚军；卢炳州；毛玉涵；张越；龚真莉；刘艳红；齐萌；茹毅；郑海学
来源：生物工程学报 2023 年 39卷 12期
