为鉴定结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)Rv0357c蛋白的生物学功能,进而寻找新的抗Mtb靶点,对Rv0357c进行生物信息学分析,构建了表达Rv0357c的原核表达载体pET-Rv0357c,并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中表达Rv0357c融合蛋白,最后用Co2+亲和层析纯化并对其进行鉴定与活性分析.生物信息学分析表明:Rv0357c是稳定的酸性亲水蛋白,且含有腺苷酸琥珀酸合成酶(AdSS)的2个保守基序和保守的活性位点,同时和人AdSS同工酶(AdSS1和AdSS2)的同源性均低于40％.SDS-PAGE分析证实Rv0357c融合蛋白以包涵体形式表达,亚基分子质量约为48 ku,经包涵体溶解、亲和纯化和重折叠,可以得到可溶性目的蛋白(复性率约为63％).Western Blot检测进一步表明过表达的蛋白为目的蛋白.此外,酶活性测定证实重折叠的Rv0357c融合蛋白有AdSS活性,比活力为0.0161U/mg.综上,Rv0357c是功能性的AdSS蛋白,这将为Rv0357c的进一步功能鉴定和开发新型抗Mtb靶点奠定基础.
作者：唐王刚；梅传忠；高佳慧；司雨；连超群
来源：生物学杂志 2021 年 38卷 3期
