目的 异源表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)H37Rv的Rv1872c蛋白,探讨抗Mtb药物新型靶点.方法 PCR扩增Rv1872c编码基因,构建融合表达载体pET-Rv 1872c,并转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中,加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.用Co2+亲和层析纯化Rv 1872c融合蛋白,并对其进行生物信息学分析.结果 经SDS-PAGE和Western blot分析,证明Rv1872c融合蛋白在E.coli中完全以包涵体形式表达,其亚基相对分子质量约46200,且在变性条件下,经亲和层析获得高纯度的Rv1872c融合蛋白.生物信息学分析表明,Rv 1872c为不稳定的碱性蛋白,主要二级结构元件为α-螺旋和无规则卷曲,无跨膜区,推测为外周膜蛋白,且为潜在的醌依赖型L-乳酸脱氢酶.结论 通过原核表达和亲和层析,成功获得了高纯度的Rv1872c融合蛋白,为进一步功能鉴定和开发抗Mtb药物新型靶点提供了参考.
作者：唐王刚；司雨；张娜；连超群
来源：中国生物制品学杂志 2020 年 33卷 10期
