目的 构建细胞因子融合蛋白IP10-EGFRvⅢScFv,建立并检测稳定表达融合蛋白的细胞株NIH3T3.方法 通过RT-PCR法扩增小鼠IP10基因,全基因人工合成EGFRvⅢScFv,两段 基因依次克隆于表达载体pcDNA3.1(-)PCMV启动子下游,二者以编码(Gly4Ser)3的柔性接头序列(linker)相连.将构建好的pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv转染NIH3T3细胞,并用G418筛选出阳性克隆,采用实时定量PCR和Western blot法检测克隆细胞 基因和蛋白的表达量,并观察转染后的NIH3T3细胞体外生长状况.结果 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)IP10-EGFRvⅢScFv,经过浓度为200 mg/L的G418工作液筛选出了稳定高表达IP10-EGFRvⅢScFv的细胞系NIH3T3,且其生长状态并未受转染基因的影响.通过荧光检测、实时定量PCR、Western blot法检测到转染72 h后 基因和蛋白表达量最高,和稳定克隆株相比,表达量并无明显差异(P＞0.05).结论构建的新型细胞因子融合蛋白可以在NIH3T3细胞内获得稳定表达,为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础.
作者：王旋；赵洪洋；罗赤星；周毅；张方成；姜晓兵
来源：华中科技大学学报(医学版) 2012 年 41卷 1期
