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目的:探讨E盒结合锌指蛋白(ZEB)2基因3′非翻译区(3′UTR)转染人胃黏膜上皮细胞GES-1后对其增殖、侵袭、迁移的影响。方法将人工合成的ZEB23′UTR质粒及miR-200b micmics采用脂质体Lipofectamine 2000转染GES-1细胞。分别设对照组、突变组和ZEB23′UTR组,qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c及ZEB1/ZEB2 mRNA的表达。再设对照组、ZEB23′UTR组、ZEB23′UTR+无义序列组和ZEB23′UTR+miR-200b micmics组。West-ern blot检测转染后ZEB1/ZEB2、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力;MTT法检测细胞增殖活性。结果与对照组及突变组相比,转染ZEB23′UTR组miR-200a/b/c的表达均下调,以miR-200b最为明显,ZEB1/ZEB2 mRNA及蛋白水平表达上调,其细胞迁移、侵袭、增殖活性均增强(P<0.05)。ZEB23′UTR+miR-200b micmics组较ZEB23′UTR组迁移、侵袭、增殖活性降低。结论 ZEB23′UTR可能通过调控miR-200a/b/c的表达进而影响其对靶基因的转录后调控,增加细胞的侵袭、迁移能力,导致GES-1细胞的恶性转化倾向。

作者:李素丽;周芳;张庆瑜;贾文亮;张安玲;韩磊;康春生

来源:天津医药 2014 年 5期

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作者:
李素丽;周芳;张庆瑜;贾文亮;张安玲;韩磊;康春生
来源:
天津医药 2014 年 5期
标签:
3′非翻译区 微RNAs 转染 胃黏膜 上皮细胞 细胞增殖 肿瘤转移 E盒结合锌指蛋白 3′untranslated regions microRNAs transfection gastric mucosa epithelial cells cell proliferation neoplasm metastasis zinc finger E-box binding homeobox
目的:探讨E盒结合锌指蛋白(ZEB)2基因3′非翻译区(3′UTR)转染人胃黏膜上皮细胞GES-1后对其增殖、侵袭、迁移的影响。方法将人工合成的ZEB23′UTR质粒及miR-200b micmics采用脂质体Lipofectamine 2000转染GES-1细胞。分别设对照组、突变组和ZEB23′UTR组,qRT-PCR检测转染后miR-200a/b/c及ZEB1/ZEB2 mRNA的表达。再设对照组、ZEB23′UTR组、ZEB23′UTR+无义序列组和ZEB23′UTR+miR-200b micmics组。West-ern blot检测转染后ZEB1/ZEB2、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力;MTT法检测细胞增殖活性。结果与对照组及突变组相比,转染ZEB23′UTR组miR-200a/b/c的表达均下调,以miR-200b最为明显,ZEB1/ZEB2 mRNA及蛋白水平表达上调,其细胞迁移、侵袭、增殖活性均增强(P<0.05)。ZEB23′UTR+miR-200b micmics组较ZEB23′UTR组迁移、侵袭、增殖活性降低。结论 ZEB23′UTR可能通过调控miR-200a/b/c的表达进而影响其对靶基因的转录后调控,增加细胞的侵袭、迁移能力,导致GES-1细胞的恶性转化倾向。

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