[目的]对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质.[方法]从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,对该基因进行异源表达和酶学性质分析.构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM20_1质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究.[结果]滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM20_1)最适pH为5.0,在pH 4-7之间能保留70％及其以上的活性.最适温度为45℃,在37℃和45℃下耐受1h,酶活不变.特别的是,该酶具有良好的NaC1稳定性,经1-5 mol/L的NaC1作用1h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaC1的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146％);当NaCl的作用浓度为5 mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135％.[结论]本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶.该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值.
作者：张文洪；杨雁霞；杨正凤；黄遵锡；李俊俊；唐湘华；杨云娟；吴倩；慕跃林；韩楠玉；许波
来源：微生物学报 2019 年 59卷 8期
