目的:克隆编码结核分枝杆菌调节基因RelA并在大肠杆菌中表达,纯化后制备兔抗RelA的抗体.方法:利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增RelA基因,构建重组表达质粒pET-32a(+ )-RelA；以重组质粒转化大肠杆菌BL21( DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行镍离子亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Westem blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性；以表达的RelA蛋白免疫家兔,制备抗RelA的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.结果:扩增了RelA基因,克隆于表达载体pET-32a(+)中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确.经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为120 000的目的蛋白；纯化的RelA免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1:6 400以上,且具有良好的特异性.结论:已成功构建RelA基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达；制备出兔抗RelA抗体,效价及特异性均良好,为进一步研究RelA蛋白在结核病中的致病机制奠定了基础.
作者：伊正君；付玉荣；许福亮；高昆山；李猛；李建花
来源：细胞与分子免疫学杂志 2012 年 28卷 2期
