目的 在大肠埃希菌(E.coli)dp表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价.方法 用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至pEASY-Blunt E1表达载体后,转化人E.coli BL21(DE3)中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trapTM HP亲和层析柱纯化目的 蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性.结果 成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒pEASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1.0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200.结论 成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病(tuberculosis,TB)的应用奠定了基础.
作者：杨延辉；董利军；梁忠喆；刘通；张炜；杨玉荣；杨志伟
来源：中国生物制品学杂志 2019 年 32卷 12期
