目的 克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因higA并在大肠杆菌中表达,纯化higA蛋白后,制备兔抗higA的多克隆抗体.方法 利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higA基因;构建重组表达质粒pET-32a(+)-higA;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗higA的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.结果 成功扩增出了higA基因,克隆于载体pET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导higA蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性higA抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上.结论 成功在大肠杆菌中表达出higA蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗higA多克隆抗体.
作者：刘丹；伊正君；付玉荣；李书轻；杨珊珊
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 7期
