目的 探讨H2O2诱导氧化应激反应对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)自噬和凋亡的影响.方法 分离培养hBMSC,分为空白组(只加培养基)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理组、H2O2处理组、H2O2联合3-MA处理组.采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测hBMSC活性氧(ROS)水平,CCK-8法检测(0、50、100、200、400)μmol/L H2O2对hBMSC增殖的影响;单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光胺基探针染色、溶酶体荧光探针LysoTrackerRed染色观察细胞自噬水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞beclin 1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3蛋白表达.结果 与空白组、3-MA预处理组比较,H2O2处理组细胞内ROS水平升高、细胞自噬体增加,细胞增殖和凋亡率显著降低;beclin 1、mTOR、c-caspase-3蛋白表达上调,p-mTOR蛋白表达下调.与3-MA处理组比较,H2O2联合3-MA处理组细胞内ROS水平升高、细胞自噬体增加,细胞凋亡率升高不明显;beclin 1、mTOR、c-caspase-3蛋白表达上调,p-mTOR蛋白表达下调.结论 H2O2可诱导hBMSC产生氧化应激,hBMSC自噬增强,细胞增殖和凋亡降低.
作者：刘治军；刘少津；郑维蓬；魏合伟；廖志浩；陈胜
来源：细胞与分子免疫学杂志 2023 年 39卷 7期
