目的 制备并鉴定Rv3428c的单克隆抗体,为结核分枝杆菌快速特异性抗原检测奠定基础.方法 同源重组得到pET28a-Rv3428c表达载体,转入E.coli BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白.重组蛋白免疫小鼠后进行细胞融合,间接ELISA、Western Blot筛选阳性杂交瘤细胞系,以筛选获得的阳性杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,蛋白A亲和层析法纯化抗体,BCA法测定浓度,ELISA和SDS-PAGE进行单克隆抗体的鉴定及亚型和效价的测定.结果 成功构建pET28a-Rv3428c表达载体、表达并纯化出目的蛋白.Rv3428c蛋白免疫小鼠使小鼠产生致敏B淋巴细胞,在聚乙二醇作用下,淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞.筛选得到的阳性杂交瘤细胞株,通过体内诱生法制备获得Rv3428c单克隆抗体.该单抗属于IgG2a亚类,κ型轻链,效价约为1:128 000,浓度为4 mg/ml.结论 本研究制备并纯化了 Rv3428c重组蛋白,获得了抗Rv3428c单克隆抗体,为Rv3428c用于结核分枝杆菌快速特异性抗原检测奠定基础.
作者：许馨月；东宝瑜；李树华；陈嘉怡；周鑫茹；曾菊梅；汪川
来源：现代预防医学 2023 年 50卷 6期
