目的 探讨PUMA在氧化应激诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡中的作用.方法 体外培养的HLEC-B3,用50 μmol·L-1H2O2刺激不同的时间后,Hoeehst 33258染色,凋亡细胞呈核固缩、碎裂形态,计数细胞凋亡率;采用Western blot方法检测PUMA及Capase-3蛋白的表达水平.采用RT-PCR方法检测PUMAmRNA表达水平;设计合成针对人PUMA基因的小干扰片段(siPUMA1、siPUMA2)和一条用性对照,用lipofectamine 2000转染细胞后,验证干扰有效性,观察其对氧化应激诱导的HLEC凋亡的影响.结果 H2O1刺激HLEC4 h、8h、12 h后,细胞凋亡率分别为3.30％±0.25％、27.16％±0.31％、48.14％±0.57％,凋亡相关蛋白Caspase-3发生时间依赖的表达上调.H2O2可诱导PUMA mRNA及蛋白质表达上调.干扰PUMA的表达能减少H2O2诱导的细胞凋亡,H2O2处理HLEC-B3 12 h后细胞凋亡率为48.24％± 0.84％,而敲除PUMA的表达后细胞凋亡率显著降低为13.72％±1.06％( siPUMA1)和17.56％±0.51％(siPUMA2).结论 PUMA介导了H2O2诱导的HLEC凋亡,可能在白内障的发生发展中发挥重要作用.
作者：杨鑫；张凤妍；方梦园；张金嵩；彭广华
来源：眼科新进展 2012 年 32卷 5期
