目的：含缬酪肽蛋白（valosin-containing protein， VCP）基因高表达能通过AKT/PI3K/NF-KappaB/MMP-9等信号通路促进骨肉瘤转移，但VCP基因上游调控机制仍不清楚。文中初步探讨miRNA-129-5p是否调控人骨肉瘤细胞中VCP基因表达及调控靶点。方法运用生物信息学预测软件TargetScanhuman 6．2（http：//www．targetscan．org/）预测miRNA-129-5p在VCP基因（ NM_007126）可能的作用位点。构建野生型VCP 3′UTR报告基因载体（ psi-VCP Vector ）及预测位点突变型VCP 3′UTR报告基因载体（psi-VCPmut Vector），测序鉴定。细胞转染分4组，psi-VCP Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP实验组，psi-VCP Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP对照组；psi-VCP突变Vector＋miRNA-129-5p mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变实验组，psi-VCP突变Vector＋阴性miRNA mimic共转染U2-OS细胞为VCP突变对照组。分别检测荧光海肾素酶活性。结果 Targetscan软件预测结果显示miRNA-129-5p在VCP 3′UTR163-169 bp有且仅有1个保守作用位点；VCP 实验组荧光海肾素酶活性（15．529±1．902）低于VCP 对照组（21．781±0．854）、VCP 突变实验组（19．978±1．377）、VCP突变对照组（21．952±1．516），差异有统计

作者：龙新华；周云飞；刘志礼；周扬；张志宏；陈文昭；黄山虎

来源：医学研究生学报 2014 年 7期