目的:探讨沉默四次跨膜蛋白1(Tspan1)基因表达对结直肠癌(CRC)细胞奥沙利铂(OXA)耐药的影响及作用机制.方法:收集31例OXA化疗敏感(OXA敏感组)和26例OXA化疗耐药(OXA耐药组)的CRC患者肿瘤组织,RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平.采用OXA浓度递增刺激法建立OXA耐药细胞株HCT116/OXA,MTT法检测耐药细胞株增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI);RT-qPCR和Western blot检测耐药细胞株及其亲本细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平.通过siRNA技术沉默HCT116/OXA细胞中Tspan1基因表达,RT-qPCR和Western blot检测转染后耐药细胞株中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平.采用不同浓度OXA干预转染后的耐药细胞株,MTT法检测细胞增殖活性并计算IC50值,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光实验检测自噬指标蛋白LC3B表达情况;Western blot检测细胞中LC3、beclin-1、P62等自噬蛋白的表达水平.结果:与OXA敏感组比较,OXA耐药组患者肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01).不同浓度OXA处理48 h后,耐药细胞株HCT116/OXA及其亲本HCT116细胞的IC50值分别为(101.6±2.7)和(16.0±0.5)mg/L,RI值为6.4.耐药细胞株HCT116/OXA中Tspan1表达水平较其亲本HCT116细胞显著升高(P<0.01).Tspan1基因沉默可

作者：李孝平；周红见；高芳芳；李伟

来源：中国病理生理杂志 2023 年 39卷 8期