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目的 探讨E2F1蛋白信号的转导通路对胆管癌细胞凋亡的影响中的作用.方法 根据E2F1基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定.采用脂质体介导法将构建好的4个siRNA表达载体分别转染于QBC939细胞中;以RT-PCR检测E2F1基因在转染前后的表达,流式细胞术检测转染后对细胞凋亡率的影响.结果 重组质粒酶切后呈线性化,酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确.转染48h后,4个siRNA表达载体均抑制了E2F1 mRNA的表达,沉默E2F1基因后细胞的凋亡率显著增加.结论 E2F1的siRNA真核表达载体转染QBC939细胞后,该表达载体具有抑制E2F1基因表达、促进细胞凋亡的功能,可以用于后续胆管癌的实验研究.
作者：汪昕；唐滔；陈波；苏瑛；邹声泉
来源：中国普通外科杂志 2008 年 17卷 2期
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