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目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6基因.方法 以重组质粒pET23a-ESAT-6为模板,亚克隆目的片段ESAT-6至酵母菌分泌表达载体pPICZaA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母茵GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子.经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法分析.结果 成功构建了pPICZaA-ESAT-6毕赤酵母表达重组质粒.经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为18kDa的蛋白.蛋白质印迹(Western blot)显示,18kDa蛋白被活动性肺结核病人血清抗体识别.结论 在毕赤酵母茵中成功表达了带有信号肽ESAT-6基因,为进一步研究新型单位疫苗打下坚实的基础.
作者：付小强；刘洪波；吴少庭
来源：中国热带医学 2011 年 11卷 9期
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