目的：观察靶向沉默CXCR4基因表达对非小细胞肺癌吉西他滨耐药株（ A549／Gem）逆转作用的影响。方法采用体外浓度梯度递增的诱导方法建立非小细胞肺癌吉西他滨耐（Gemcitabine）获得性耐药细胞株（A549／Gem）。通过Quantitative RT－PCR （RT－qPCR）检测A549与A549／Gem细胞中CXCR4的表达量。通过体外转染CXCR4 shRNA干扰载体到A549／Gem细胞，RT－qPCR及蛋白质印迹法（ Western blot ）验证shRNA对CXCR4基因的靶向沉默效率。进而采用MTT法检测A549、A549／Gem和CXCR4沉默表达细胞株（A549／Gem－CXCR4）对Gemcitabine的半数抑制浓度（50％inhibitory concentration，IC50）和耐药指数（resistance index，RI）；最后采用Western blot法检测A549、A549／Gem和A549／Gem－CXCR4细胞中JNK、p38和ERK1／2磷酸化蛋白的表达水平的变化。结果通过体外浓度梯度递增的诱导方法成功建立A549／Gem细胞株（ P＜0．05）。 A549／Gem细胞株中CXCR4的表达量明显高于A549细胞株。体外转染CXCR4 shRNA可明显下调A549／Gem细胞株中CXCR4表达。 MTT法检测A549，A549／Gem和A549／Gem－CXCR4对Gemcitabine的IC50分别为（0．08±0．01）μmol／L，（14．01±0．21）μmol／L和（1．84±0．61）μmol／L。 A549／Gem细胞株

作者：王立文；沈晓洁；俞茹云；林莉莉

来源：中国生化药物杂志 2015 年 12期