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血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区具有7个免疫球蛋白样的袢(Ig-like loop),氨基端3个loop负责与其配体VEGF的结合.为了寻求能与配体结合的更小的Flt-1片段,在对Flt-1胞外前3个loop氨基酸组成和晶体结构分析的基础上,应用酵母双杂交系统对Flt-1的配体结合城进行筛选.利用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2,1-2,2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526,采用滤纸法和液体培养定量检测法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果显示,Flt-1胞外loop 2-3与loop 1-3的配体结合能力相差不大,1oop 1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.
作者：马骊；张智清；王小宁；陈爱君；姚立红；姜忠良
来源：中国生物化学与分子生物学报 2001 年 17卷 1期
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