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为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activatingpolypeptide,PACAP),根据大肠杆菌的密码偏好性,设计并人工合成编码38个氨基酸的PACAP基因.克隆到表达载体pET-35b(+),构建重组质粒pET-PACAP,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLvsS+.实现纤维素结合域(cellulose binding domain,CBD)与PACAP融合蛋白的表达,并在两者之间引入(凝血)因子Xa识别位点(Ile-Glu-Gly-Arg↓).融合蛋白CBD-PACAP经纤维素亲和层析纯化后,因子Xa酶切释放PACAP.在因子Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽(Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly)明显提高了融合蛋白对因子Xa的敏感性.HPLC进一步纯化得到纯度大于95
作者：余榕捷；洪岸；张玲；周天鸿；戴云；高媛
来源：中国生物化学与分子生物学报 2004 年 20卷 3期
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