目的 在E.coli中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分子伴侣Acr2蛋白,并分析其功能.方法 将重组质粒pET-28a-Acr2转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-Acr2蛋白,经Ni-NTA层析及Superdex? 200 10/300 GL凝胶过滤层析纯化获得Acr2蛋白.将Acr2蛋白经热变性(100 ℃温浴15 min)及化学变性(8mol/L尿素,37 ℃温浴4 h)后进行自发再折叠和再组装的复性处理,采用圆二色性光谱法和非变性SDS-PAGE检测变性及复性后Acr2蛋白的二级结构.通过底物结合试验检测Acr2蛋白在体外的分子伴侣功能.结果 纯化Acr2蛋白的相对分子质量约为232 000,纯度达90％以上,浓度约为2mg/mL.Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然二级结构,且在48 ℃条件下可与变性的苹果酸激酶(malate dehydrogenase,MDH)形成稳定复合物.结论 Acr2蛋白经变性-复性处理后可恢复其天然分子构象,且具有体外分子伴侣活性.本研究为制备具有天然活性的结核杆菌蛋白抗原提供了新策略.
作者：张宗欣；赵纪元；孙红宾
来源：中国生物制品学杂志 2024 年 37卷 1期
