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目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)纳米抗体(nano-bodies,Nbs),并评价其结合活性和中和活性.方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区(framework region,FR)和抗原互补决定区(complementarity determining region,CDR)序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性.结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16 μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450 μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),能够有效中和病毒.结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础.

作者:王岑嵘;赵慧;卢井才;袁若森;宋月爽;王亚军;王宇迪;姜春来;魏巍;吴山力

来源:中国生物制品学杂志 2024 年 37卷 4期

知识库介绍

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作者:
王岑嵘;赵慧;卢井才;袁若森;宋月爽;王亚军;王宇迪;姜春来;魏巍;吴山力
来源:
中国生物制品学杂志 2024 年 37卷 4期
标签:
呼吸道合胞病毒 纳米抗体 结合活性 中和活性 Respiratory syncytial virus(RSV) Nanobodies(Nbs) Binding activity Neutralizing activity
目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)纳米抗体(nano-bodies,Nbs),并评价其结合活性和中和活性.方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区(framework region,FR)和抗原互补决定区(complementarity determining region,CDR)序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性.结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16 μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450 μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),能够有效中和病毒.结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础.

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