目的 探讨GLT25D2基因在对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝毒性损伤中是否对自噬有调控作用.方法 选择GLT25D2+/+野生型C57BL/6J小鼠和GLT25D2-/-基因敲除C57BL/6J小鼠为研究对象.① 体内实验:将20只野生型小鼠和20只GLT25D2-/-小鼠分别按随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和APAP干预组,每组10只.腹腔注射25 g/L的APAP溶液500 mg/kg建立小鼠肝毒性损伤模型;PBS对照组腹腔注射等量PBS.制模成功后立即处死小鼠取肝组织,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织自噬相关蛋白ATG5、ATG7、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达;电镜下观察肝组织超微结构改变,评估自噬水平.② 体外实验:另取野生型小鼠和GLT25D2-/-小鼠各1只,采用两步胶原灌注法提取原代肝细胞并分为两部分:一部分以5 mmol/L APAP溶液干预0、8、12 h后收集细胞,采用Western Blot试验检测肝细胞自噬相关蛋白ATG5、ATG7、LC3、P62的表达;另一部分用绿色荧光蛋白-LC3质粒(GFP-LC3)转染24 h,分别给予PBS(PBS对照组)和5 mmol/L APAP(APAP干预组)温育12 h,荧光显微镜下观察GFP-LC3阳性表达以反映自噬体的形成情况.结果 ① 体内实验结果显示:与相应PBS对照组相比,经APAP干预后,野生型及GLT25D2-/-小鼠肝组织中自噬正性相关蛋白ATG5、ATG7、LC3

作者：张晓慧；郭乐乐；刘贞利；张晶；任锋

来源：中华危重病急救医学 2018 年 30卷 9期