目的：探讨c?myc启动子结合蛋白1（MBP?1）基因沉默对人骨肉瘤Saos?2细胞生长的影响。方法实验分为3组：正常对照组（未转染骨肉瘤细胞）、阴性对照组（转染错义序列组）和沉默组（转染MBP?1 shRNA组）。设计2条MBP?1基因的RNA干扰片段及1条阴性对照siRNA，并与pSIREN?retroQ质粒连接。将重组pSIREN?retroQ质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染骨肉瘤Saos?2细胞。实时PCR和Western blot分别检测MBP?1表达。CCK?8法对MBP?1沉默后骨肉瘤Saos?2细胞生长进行检测。Western blot检测对照组和沉默组cyclin D1和cyclin E的表达。结果通过PCR扩增及测序，说明已成功构建MBP?1沉默及对照重组pSIREN?retroQ 质粒。实时PCR结果显示，沉默组MBP?1 mRNA相对表达量与对照组相比显著下调（P<0.05）。Western blot结果显示，沉默组MBP?1蛋白表达量与对照组相比也显著下调。CCK?8法结果表明，沉默组细胞在48、72和96 h时增殖能力均比对照组显著升高（P<0.05）。沉默组cyclin D1和cyclin E的表达显著高于对照组（P<0.05）。结论 MBP?1基因沉默后骨肉瘤Saos?2细胞生长被明显促进，为寻找骨肉瘤基因治疗新靶点打下基础。
作者：施鑫鹤；耿晢；施星臣；马克君；朱宏文；任雯；周雅丽
来源：中国医科大学学报 2016 年 45卷 7期
