目的 确定TAT-tCNTF融合蛋白能够透过细胞膜进入细胞内,并研究其对Aβ诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法 重组PCR获得人截短型CNTF基因后,与pBV 220-TAT载体连接,在大肠杆菌中表达,细胞免疫荧光方法检测TAT蛋白运载融合蛋白穿过SH-SY5Y细胞膜的作用,Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞产生神经毒性,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测融合蛋白对细胞存活率的影响,Heochst 33342/PI荧光双染法进行细胞凋亡和坏死的形态学观察,并进行LDH释放分析进一步检测TAT-tCNTF对细胞损伤后的保护作用.结果 成功构建pBV220-TAT-tCNTF表达载体,Western blot结果表明重组融合蛋白可以与CNTF抗体特异性结合,细胞免疫荧光方法显示TAT-tCNTF能大量进入细胞,而rhCNTF只有微量进入细胞.对Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞MTT、Heochst 33342/PI荧光双染法及LDH分析都表明TAT-tCNTF能明显提高细胞的存活率.结论 TAT-tCNTF融合蛋白可以跨越细胞膜,能够保护Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞,具有促进细胞生存生长的活性.
作者：曲恒燕；刘泽源；李媛媛；孙曼霁
来源：中国药理学通报 2010 年 26卷 4期
