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目的将结核分支杆菌ESAT抗原编码区基因克隆,并使其在大肠埃希菌中表达.方法培养并抽提结核分支杆菌基因组,采用聚合酶链反应(PCR)扩增编码ESAT的全长cDNA,并插入到原核表达载体pGEX5T中,构建pGEX5T-ESAT重组质粒.IPTG诱导使该基因在k802菌中表达,并用免疫印迹(Western blot)方法确证表达蛋白的特异性.结果 PCR扩增获得了单一的条带,大小约0.3 kb;全自动测序与Genbank中登录的序列完全相同.获得了pGEX5T-ESAT重组子并在k802菌中表达,该蛋白可被结核病患者血清特异地识别.结论扩增和克隆了结核杆菌ESAT抗原的全长cDNA并在大肠埃希菌中获得表达,为进一步研究其在结核病诊断和防治中的应用打下了基础.
作者：王庆敏；胡振林；孙树汉；张巧敏
来源：中华传染病杂志 2003 年 21卷 1期
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