目的 建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型,检测成骨细胞凋亡过程中与Bcl-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子(Bcl-2 interacting mediator,Bim)、Bcl-2蛋白相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)和Bcl-2蛋白拮抗剂(Bcl-2 antagonist/killer,Bak)的表达,探寻保护成骨细胞的方法,为牙周炎的发病机制研究提供依据.方法 提取牙龈蛋白酶并测定其活性；将0.453、0.906、1.812 U/L牙龈蛋白酶分别与成骨细胞共培养0、16、24和48 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色及膜联蛋白V-碘化丙啶双染色检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)凋亡,建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型；1.812 U/L牙龈蛋白酶与成骨细胞共培养0、4、8、16、24和48 h,蛋白质印迹法确定成骨细胞凋亡过程中Bim、Bax、Bak的蛋白表达；胰蛋白酶抑制剂抑制1.812 U/L牙龈蛋白酶活性后与成骨细胞共培养24 h,蛋白质印迹法检测Bim蛋白表达与成骨细胞凋亡率的改变.结果 精氨酸-牙龈蛋白酶活性为(18.11±2.11) U/L,赖氨酸-牙龈蛋白酶活性为(1.02 ±0.25) U/L;DAPI染色显示1.812 U/L牙龈蛋白酶可诱导成骨细胞凋亡,16h凋亡率为(6.31±0.37)％,24 h达(11.20 ±0.35)％,48 h为(10.80±0.46)％；膜联蛋白V-碘

作者：陈玉婷；宋祥晨；张福萍；梁敏

来源：中华口腔医学杂志 2013 年 48卷 5期