目的 构建miR-34a重组慢病毒载体,观察其转染后对肝癌细胞活力、细胞周期和凋亡的影响,并观察转染后对阿霉素体外抑制肝癌细胞生长的影响.方法 构建含miR-34a基因的重组慢病毒载体,转染人肝癌细胞并阿霉素干预后,测定细胞活性、检测细胞周期、凋亡及相关蛋白表达水平的变化.结果 成功构建了miR-34a的重组慢病毒载体LV-hsa-mir-34a(元件顺序:Ubi-MCS-SV40-EGFP-IRES-puromycin),经质粒酶切和测序鉴定正确.与对照组比较,重组慢病毒载体转染肝癌细胞后miR-34a表达上调,差异有统计学意义(HepG2:t=15.36,P＜0.01;Hep3B:t=36.75,P＜0.01;Bel-7402:t =24.17,P＜0.01).与对照组比较,miR-34a表达上调并阿霉素干预后肝癌细胞活力下降(HepG2:t=7.12,P＜0.01;Hep3B:t=8.89,P＜0.01;Bel-7402:t=13.62,P＜0.01),G1期细胞显著增多(HepG2:F=137.65,P＜0.01;Hep3B:F=143.39,P＜0.01;Bel-7402:F=1 306.47,P＜0.01),细胞凋亡增加(HepG2:F=386.14,P＜0.01;Hep3B:F=881.94,P＜0.01;Bel-7402:F=885.89,P＜0.01),差异有统计学意义,细胞周期蛋白和凋亡蛋白发生相应改变.结论 构建miR-34a重组慢病毒载体并转染肝癌细胞后可高效表达miR-34a,miR-34a高表达可以降低肝癌细胞的恶性生物学行为.miR-34a重组慢病毒载体感染肝癌细胞后,阿

作者：郑顺贞；孔俊杰；贺竞毅；杨凤辉；刘军

来源：中华普通外科杂志 2017 年 32卷 10期