目的 从原发性肝癌(HCC)患者术后的肿瘤组织中提取、培养肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs),进一步分选、扩增其CD8阳性亚群(CD8+TILs),并研究其特性.方法 标本取自38例肝癌根治术后的肿瘤组织,免疫组织化学染色观察癌巢组织和癌旁组织TILs的分布,通过机械剪碎、混合酶消化和不连续密度梯度离心法分离提取TIL前体细胞.采用重组人白介素2进行激活,抗CD3、抗CD28抗体进行共刺激扩增,用磁珠分选出CD8+TILs,CCK8法观察CD8+TILs对肝癌细胞Hep3B、HepG2生长的影响.结果 TILs富集于癌旁组织,12例成功提取TILs,6例培养并实现大量扩增,扩增17～50倍后细胞数为(1.2～2.5)×108个,CD3+细胞比例为(77.53±16.37)％,CD3+CD4+比例为(27.08±21.56)％,CD3+CD8+比例(44.55±12.73)％,细胞活力为(90.5±3.0)％,CD8+TILs对肿瘤细胞系Hep3B、HepG2有较强的生长抑制作用.结论 本研究成功建立高效提取、培养CD8+TILs的方法,获得具有高抗肿瘤活性的CD8+TILs,为晚期肝癌等实体瘤的过继免疫治疗提供研究基础.
作者：黄镇辉；徐晓艳；蒋小峰；薛平；曾嘉敏；魏宜胜
来源：中华普通外科学文献（电子版） 2020 年 14卷 3期
