目的 探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响,并初步分析其分子机制.方法 采用含体积分数10％ FBS的RPMI 1640培养液(简称培养液)常规培养HaCaT细胞.(1)取对数生长期细胞,按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200 nmol/L雷帕霉素组,每组6孔.5个雷帕霉素组细胞分别加入含相应质量浓度雷帕霉素的培养液,对照组细胞加入含二甲基亚砜(DMSO)的培养液.常规培养4h后,采用酶标仪检测细胞增殖活性(以吸光度值表示).(2)取对数生长期细胞,同实验(1)分组培养,每组1孔.常规培养4h后,在活细胞工作站下观察各组细胞3h内运动范围,计算细胞曲线运动速度,筛选雷帕霉素适宜实验浓度.(3)取对数生长期细胞,按随机数字表法将其分为雷帕霉素组和对照组,每组1孔.雷帕霉素组细胞加入含50 nmol/L雷帕霉素的培养液,对照组细胞加入含DMSO的培养液.常规培养4h后行划痕实验,观察划痕后0(即刻)、5、10、15 h的划痕面积并计算后3个时相点的细胞迁移率.(4)取对数生长期细胞,同实验(3)分组培养,每组1孔.用蛋白质印迹法检测细胞黏着斑激酶(FAK)活性(以磷酸化FAK与FAK灰度值比值表示).上述实验重复3次或5次.对数据行单因素方差分析、LSD检验、t检验.结果 (1)对照组及1、5、50、100、200 nmol/L雷帕霉素组细胞增殖活性分别为1
作者：张均辉；张东霞；赵利平；闫甜甜；张琼；贾杰只；黄跃生
来源：中华烧伤杂志 2016 年 32卷 1期
