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LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响
编辑人员丨2024/2/3
目的:通过慢病毒载体构建亮氨酸羟基甲基转移酶1(LCMT1)过表达THP-1细胞株,探讨LCMT1对THP-1细胞和THP-1源性巨噬细胞M2型极化的调控作用.方法:利用慢病毒技术,构建LCMT1过表达载体.设置blank组、OE-control组和OE-LCMT1组.荧光显微镜观察各组细胞的绿色荧光,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测LCMT1 mRNA和蛋白表达水平以及PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平.将THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导分化为M2型巨噬细胞.实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化标志物c型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达.结果:与blank组相比,OE-control和OE-LCMT1组表达绿色荧光,OE-control组的增殖曲线下降(P＜0.001),LCMT1和PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);与OE-control组相比,OE-LCMT1组增殖曲线下降(P＜0.05),LCMT1和PP2Ac甲基化蛋白表达升高(P＜0.05),PPME-1和PP2Ac去甲基化蛋白表达降低(P＜0.01),总PP2Ac蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).与Blank M0组相比,Blank M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22mRNA水平升高(P＜0.05);与OE-control M2组比较,OE-LCMT1 M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22mRNA水平降低(P＜0.05).结论:成功构建了LCMT1过表达的THP-1细胞株,LCMT1过表达可抑制THP-1细胞的增殖;维持总PP2Ac蛋白水平,增强PP2Ac甲基化并伴随PPME-1和PP2Ac去甲基化水平降低;下调M2型巨噬细胞极化标志物的表达,抑制M2型巨噬细胞极化.
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编辑人员丨2024/2/3
