目的 观察化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,并探究其作用机制.方法 采用1 mmol/L油酸棕榈酸混合液诱导HepG2细胞24 h构建脂质沉积模型,分别给予化瘀祛痰方含药血清、AMP依赖的蛋白激酶[Aden-osine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]抑制剂及抑制剂+中药联合干预,油红O染色观察脂质沉积情况,试剂盒检测细胞中甘油三酯(triglyceride,TG)含量,蛋白印迹法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(A-cetyl CoA Carboxylase,ACC)、p-ACC、肉碱棕榈酰基转移酶-1(Carnitine Palmitoyltransferase-1,CPT1)蛋白相对表达量,以及实时荧光定量法检测细胞中AMPK、ACC、CPT1 mRNA相对表达水平.结果 与模型组相比,化瘀祛痰方含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,细胞中p-AMPK、CPT1蛋白及CPT1 mRNA相对表达量升高,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量显著降低(P＜0.01),AMPK蛋白及基因相对表达水平无明显差别(P＞0.05);AMPK抑制剂组细胞中脂滴及TG含量升高,AMPK、CPT1蛋白及mRNA相对表达量降低,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量升高(P＜0.05或P＜0.01);与AMPK抑制剂相比,抑制剂+中药含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,AMPK、p-AMPK蛋白及AMPK mRNA相对表达水平无显著差异(P＞0.05),ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量降低、CPT1则相对表达升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 化瘀祛痰方含药血清可能通过激活AMPK使其磷酸化,并调控ACC/CPT1信号通路,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸氧化,从而降低HepG2细胞内的甘油三酯水平及脂质沉积.

目的:利用PCR array技术探讨化瘀祛痰方药对高脂血症大鼠肝脏mTOR介导自噬相关基因的影响.方法:30只SD大鼠随机分为正常对照组、高脂血症组、化瘀祛痰方组.正常对照组给予普通大鼠饲料喂饲,高脂血症组、化瘀祛痰方组予高脂饲料喂饲,造模60 d后,化瘀祛痰组给予化瘀祛痰方煎剂10 mL/次,1次/d,灌胃30d(该剂量是根据人与大鼠的等效剂量进行换算所得).全自动生化分析仪检测大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量,HE及油红O染色观察肝脏形态及肝脏脂质沉积情况,PCR array技术分析化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏mTOR介导自噬相关基因的影响.结果:高脂血症组血脂(TC、LDL-C)含量升高,出现肝脏脂质沉积及脂肪空泡;化瘀祛痰方组血脂(TC、LDL-C)降低,肝脏脂滴减少.PCR array结果发现以mTOR为中心的不同作用途径基因Akt1、Bcl2、lgf1、Mapk14、Mapk8、Mtor、Becn1(brclin1)在3组比较发生差异性改变.结论:化瘀祛痰方可通过调控mTOR介导自噬相关基因使高脂血症大鼠肝脏自噬增强,改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.

目的:探讨化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏PI3K/Akt信号通路的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组10只.采用高脂饲料喂养进行高脂血症模型复制后,中药低、中、高剂量组分别给予含有生药量为0.45、0.9、1.8 g/mL的化瘀祛痰方药煎剂进行治疗,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃.4周后HE染色观察各组大鼠肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测各组大鼠肝脏PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平.结果:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.05),HDL-C水平降低(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平上调(P＜0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠肝脏脂肪变性呈不同程度减低,TC、LDL-C水平显著降低(P＜0.05),HDL-C水平升高(P＜0.05),TG水平未发生显著改变(P＞0.05);PI3K、p-Akt蛋白表达水平呈不同程度下调(P＜0.05).结论:化瘀祛痰方可以通过调节PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达,从而改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤.

目的:探究化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物的影响,并探讨其相关的作用机制.方法:健康SPF级雄性新西兰白兔90只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方高、中、低剂量组(4,8,16 g·kg-1),辛伐他汀组(1.4 mg·kg-1),每组15只.正常组给予基础饲料喂养,其他组采用高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型,造模8周后,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组给予相应药物溶液,正常组和模型组给予等量生理盐水,4周后,全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TC),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白(high-densitylipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变;分光光度计法检测家兔肝脏线粒体呼吸链酶复合物活性;Blue-Native-Page技术检测线粒体呼吸链酶复合物含量.结果:与正常组比较,模型组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著升高,HDL-C显著降低;与模型组比较,化瘀祛痰方高、中、低剂量组与辛伐他汀组家兔血清中TC,TG,LDL-C显著降低,HDL-C显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),其中化瘀祛痰方中以高剂量效果最为显著.HE及油红0染色结果显示模型组较正常组比较家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内脂滴蓄积明显;与模型组比较,化瘀祛痰高、中、低剂量组及辛伐他丁组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常,其中化瘀祛痰方中以高剂量效果最为显著.与正常组比较,模型组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性及含量显著降低(P＜0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方高剂量组与辛伐他汀组肝脏线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ活性和含量明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:化瘀祛痰方可能是通过影响线粒体呼吸链酶复合物的活性及含量减少脂质沉积,防治动脉粥样硬化.

目的 观察化瘀祛痰方对动脉粥样硬化(AS)家兔肝脏线粒体自噬相关蛋白的影响,探讨线粒体自噬对肝脏脂质沉积的调控作用.方法 SPF级健康雄性新西兰纯种家兔60只,随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组,正常组喂饲基础饲料,模型组、化瘀祛痰组、辛伐他汀组喂饲高脂饲料造模.造模8周后,化瘀祛痰组、辛伐他汀组给予相应药物,正常组及模型组给予相应体积生理盐水.4周后,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,HE染色观察肝脏组织的形态变化,油红O染色观察脂滴蓄积,Western blotting 检测肝脏组织线粒体自噬相关蛋白 FUNDC1、P62及 LC3的相对表达量.结果 与正常组相比,模型组家兔血清TC、TG、LDL-C含量显著上升(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.05);与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组血清TC、TG、LDL-C含量显著下降(P<0.05),HDL-C含量显著上升(P<0.05).HE染色结果,模型组家兔肝脏组织肿胀明显,脂肪空泡形成;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪空泡显著减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常.油红O染色结果,模型组肝细胞肿大变圆,胞浆疏松,胞浆内脂滴蓄积明显;化瘀祛痰组及辛伐他汀组脂肪变性程度降低,脂质空泡数量减少.Western blotting结果,与正常组相比,模型组家兔肝组织中线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著升高(P<0.05),P62相对表达量显著降低(P<0.05),而化瘀祛痰组及辛伐他汀组与模型组相比线粒体自噬相关蛋白LC3、FUNDC1相对表达量显著降低(P<0.05),P62相对表达量显著升高(P<0.05).结论 化瘀祛痰方可调控线粒体自噬相关蛋白,减少AS家兔肝组织脂质沉积,减缓动脉粥样硬化的形成和发展.

目的 研究化瘀祛痰方调控HIF-1α/VEGF/VEGFR-2通路对动脉粥样硬化家兔主动脉脂质斑块的影响,探讨化瘀祛痰方对动脉粥样硬化脂质斑块的作用机制.方法 将60只新西兰家兔随机分为对照组15只,实验组45只.实验组45只家兔通过免疫性内皮损伤合并高脂饲料喂养的方法制备动脉粥样硬化模型,对照组喂饲普通饲料.8周后,将实验组家兔随机分为模型组、化瘀祛痰方组及辛伐他汀组.各组给予相应药物干预,对照组、模型组给予同体积生理盐水,每天1次,连续4周后取材.全自动生化分析仪检测各组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)含量;HE和油红0染色观察家兔主动脉病理形态学改变,测量内膜、中膜厚度;免疫组化法测定CD31平均光密度值;ELISA检测血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)含量;Western blot法检测主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达.结果 模型组血清TG、TC、LDLC水平较对照显著升高(P＜0.01),HDLC水平显著降低(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组血清TG、TC、LDLC含量较模型组降低(P＜0.05或P＜0.01),HDLC含量均升高(P＜0.05或P＜0.01).病理染色可见模型组主动脉内膜细胞增生,有大量泡沫细胞和脂质沉积,经化瘀祛痰方和辛伐他汀治疗后均可见明显改善.模型组内膜、中膜厚度较对照组显著增厚(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组显著减小(P＜0.01).模型组主动脉CD31平均光密度值较对照组显著升高(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组显著降低(P＜0.01).模型组血清HIF-1α和VEGF含量较对照组显著升高(P＜0.01),而化瘀祛痰方组和辛伐他汀组较模型组均降低(P＜0.05或P＜0.01).模型组主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达较对照组显著升高(P＜0.01),经化瘀祛痰方和辛伐他汀治疗后,两组主动脉HIF-1α、VEGF、VEGFR-2蛋白表达水平较模型组均有显著降低(P＜0.01).结论 化瘀祛痰方稳定动脉粥样硬化脂质斑块,其机制可能与调控HIF-1α/VEGF/VEGFR-2通路抑制血管新生有关.

目的:探讨载脂蛋白敲除(Apoe-/-)小鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关mRNA的表达变化及化瘀祛痰方药对其的干预作用,探讨化瘀祛痰方药抗AS作用及可能的机制.方法:50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组,丹参酮ⅡA组(30 mg·kg-1 ·d-1),化瘀祛痰高剂量组(20 g·kg-1·d-1),化瘀祛痰中剂量组(10 g·kg-1·d-1),化瘀祛痰低剂量组(5 g·kg-1·d-1),10只C57BL/6/J小鼠作为正常组.全自动生化仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG),胆固醇(cholesterol,TC),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low-densitylipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)检测各组小鼠主动脉斑块情况;油红0检测各组小鼠肝脏脂质沉积情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)测定各组小鼠血清中血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),白细胞介素-6(intedeukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠主动脉c-Jun氨基末端激酶(c-Jun n-terminal kinase,JNK),磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK),p38 MAPK,p-p38 MAPK,细胞外调节激酶(extracellular regulated proteinkinases,ERK),磷酸化细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,p-ERK)蛋白的表达变化.结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC,TG,LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低;主动脉管腔见较大粥样斑块,肝细胞中见大量脂质沉积;血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量增加;血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显增加(P＜0.05).与模型组比较,丹参酮ⅡA组与化瘀祛痰各组小鼠TC,TG,LDL-C明显下降,HDL-C明显升高,主动脉管腔中粥样斑块面积和肝脏脂质沉积量明显减少,血清内相关炎性因子TNF-α,IL-6,VCAM-1,ICAM-1含量降低(P＜0.05);血管内相关MAPK信号通路p-p38,p-JNK蛋白表达明显降低(P＜0.05),p-ERK表达趋势不明显.结论:化瘀祛痰方药可抑制ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成,其机制可能与调控血管MAPK信号通路基因表达有关.

目的 探讨化瘀祛痰方通过干预MAPK信号通路改善心功能延缓AS的作用机制.方法 将10只C57BL/6/J小鼠作为正常组,50只ApoE-/-小鼠喂食高脂饲料8周后随机分为,模型组、丹参酮ⅡA组(简称丹参组)、化瘀祛痰方低剂量组(简称化瘀方低组)、化瘀祛痰方中剂量组(简称化瘀方中组)、化瘀祛痰方高剂量组(简称化瘀方高组),每组10只.在造模8周后,以对应药物灌胃8周.超声检测小鼠心功能,取血与心脏,采用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量,油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况,ELISA方法检测小鼠心肌组织TNF-α、ICAM-1、VCAM-1含量,Western Blot法检测小鼠心肌组织JNK、p38、ERK蛋白的磷酸化水平.结果 与正常组比较,模型组小鼠LVIDd及LVIDs增大(P＜0.05),LVEF及LVFS均显著降低(P＜0.05);肝脏脂质沉积明显,血清TG、TC、LDL-C水平显著升高(P＜0.05),HDL-C水平显著降低(P＜0.05);心肌组织TNF-α、ICAM-1、VCAM-1含量、JNK、p38、ERK的磷酸化水平升高(P＜0.05);与模型组比较,丹参组、化瘀方低、中、高组LVIDd及LVIDs减小(P＜0.05),LVEF及LVFS均显著降低(P＜0.05),肝脏脂质沉积改善,血清TG、TC、LDL-C水平下降,HDL-C水平显著升高,心肌组织TNF-α、ICAM-1、VCAM-1含量、JNK、p38、ERK的磷酸化水平下降(P＜0.05).结论 化瘀祛痰方具有通过改善小鼠心功能,延缓AS的作用,其机制与降低TNF-α诱导ICAM-1、VCAM-1的表达,抑制JNK、ERK、p38 MAPK等MAPK信号途径引起的炎症反应有关.

目的:以PI3 K/Akt/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤的分子机制.方法:60只新西兰雄性大耳白家兔随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只.正常组给予普通家兔饲料喂养,其他各组一次性静脉注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)后以高脂饲料喂养以建立动脉粥样硬化模型,化瘀祛痰方组给予方药剂量为8 g·kg-·d-1,辛伐他汀组给药量为1.4 mg·kg-·d-1,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃.4周后,HE染色观察各组家兔肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测肝脏PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组家兔肝脏脂肪变性明显,血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P＜0.01),HDL-C水平显著降低(P＜0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下调(P＜0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组和辛伐他汀组肝脏脂肪变性呈不同程度恢复,血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P＜0.01),HDL-C水平显著升高(P＜0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平显著上调(P＜0.05或P＜0.01).结论:化瘀祛痰方可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,调控动脉粥样硬化家兔肝脏自噬稳态,减缓肝脏脂质损伤,进而改善动脉粥样硬化.

目的 探讨化瘀祛痰方治疗动脉粥样硬化的可能作用机制.方法 将60只雄性新西兰白兔随机分为空白组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只.空白组普通饲料喂养,其他组高脂饲料喂养同时结合免疫损伤法建立动脉粥样硬化模型.造模8周后,化瘀祛痰方组给药剂量16g/(kg·d),辛伐他汀组给药剂量1.4mg/(kg·d),空白组和模型组给予8 ml/(kg·d)生理盐水.4周后苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变;Elisa法检测家兔肝脏及血清中白细胞介素18 (IL-18)和白细胞介素1β(IL-1β)含量;Western blot法检测家兔肝脏含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2(AIM2)、gasdermin D蛋白(GSDMD)蛋白表达. 结果 与空白组相比,模型组家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内有大量脂滴蓄积;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量升高,细胞焦亡相关Caspase-1、GSDMD、NLRP3、AIM2蛋白表达水平上升(P ＜0.05或P＜0.01).与模型组相比,化瘀祛痰方组及辛伐他汀组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量下降,细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD、NLRP3表达水平下降(P＜0.05或P＜0.01),AIM2蛋白表达水平无明显改变(P＞0.05). 结论 化瘀祛痰方可能通过调控NLRP3/Caspase-1通路影响细胞焦亡,从而改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积.