目的:基于肠道菌群探索帕宁Ⅰ号方改善帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠行为学和神经递质水平的作用机制.方法:从60 只小鼠中随机选取10 只作为正常组,其余小鼠腹腔注射MPTP(30 mg·kg-1)建立PD模型.将造模成功的50 只小鼠随机分为模型组、美多芭组、帕宁Ⅰ号方低剂量组、中剂量组及高剂量组,每组10 只.第 6 次注射MPTP后开始灌胃,连续14 d,每3 天进行1 次爬杆实验、旷场实验和步态分析实验.采用UPLC-HRMS法鉴定帕宁Ⅰ号方的活性成分,ELISA法检测纹状体多巴胺(dopamine,DA)含量,免疫组化法检测纹状体酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平,16S rRNA高通量测序技术检测肠道菌群结构.结果:与正常组比较,模型组小鼠的末次爬杆时间和步宽增加,运动路程和步长减少(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方低剂量组、中剂量组、高剂量组及美多芭组小鼠的末次爬杆时间和步宽减少,运动路程和步长增加(P<0.000 1).帕宁Ⅰ号方的化学成分主要包括苯丙氨酸、3-吲哚乳酸、牡荆素等.与正常组比较,模型组小鼠纹状体DA含量下降(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方中剂量组、高剂量组及美多芭组小鼠的纹状体DA含量升高(P<0.000 1).免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组小鼠纹状体TH表达水平降低(P<0.000 1);与模型组比较,帕宁Ⅰ号方高剂量组和美多芭组小鼠纹状体TH表达水平升高(P<0.01).与正常组比较,模型组小鼠Turicibacter、Odoribacter的相对丰度增加,Lactobacillus、Bifidobacterium、Prevotella的相对丰度减少.与模型组比较,帕宁Ⅰ号方高剂量组和美多芭组小鼠Prevotellaceae_Prevotella、Lactobacillus、Bifidobacterium、Prevotella的相对丰度增加.Staphylococcus、Turicibacter、Rikenella相对丰度与爬杆时间呈正相关(P<0.05);Prevotella_Prevotella相对丰度与步长呈正相关(P<0.05);Prevotella相对丰度与爬杆时间呈负相关,与旷场路程呈正相关(P<0.01);Lactobacillus、Bifidobacterium的相对丰度与步宽呈负相关(P<0.05).Staphylococ-ccus、Turicibacter相对丰度与DA含量、TH表达水平呈负相关(P<0.05);Prevotella相对丰度与DA含量、TH表达水平呈正相关(P<0.01);Lactobacillus相对丰度与TH表达水平呈正相关(P<0.05);Allobaculum相对丰度与DA含量呈正相关(P<0.05).结论:帕宁Ⅰ号方可能通过调节肠道菌群结构,增加有益菌比例,减少有害菌比例,从而改善PD小鼠的行为学和神经递质水平.

目的 基于PTEN诱导激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路研究槲皮素减轻血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马神经元损伤的作用机制.方法 通过双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD大鼠模型,分为模型组及槲皮素低、中、高(25、50、100mg/kg)组和欧来宁(14.8g/kg)组,另取12只大鼠作为假手术组,给予药物干预21d后,采用穿梭箱实验评价大鼠学习记忆能力,比较各组大鼠步入潜伏期(step-through latency,STL)及在暗室中花费的总时间(total time spent in the dark chamber,TDC);采用Nissl染色检测大鼠海马组织神经元损伤情况;采用透射电镜观察大鼠海马区神经元超微结构;采用ELISA法检测大鼠脑组织中乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平和血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-17、IL-1β水平;采用 Western blotting 检测大鼠脑组织中自噬相关蛋白与PINK1/Parkin信号通路相关蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠海马组织神经元损伤及超微结构受损严重,神经元内出现少量自噬体;STL显著降低(P＜0.05),TDC显著升高(P＜0.05);脑组织中Ach和5-HT水平显著降低(P＜0.05),血清中IL-6、IL-17和IL-1β水平显著升高(P＜0.05);脑组织中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein 1 light3 Ⅱ,LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ、Beclin1、PINK1和 Parkin 蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05).与模型组比较,槲皮素组大鼠海马组织神经元损伤及超微结构受损减轻,且神经元自噬现象增强;STL显著升高(P＜0.05),TDC显著降低(P＜0.05);脑组织中Ach及5-HT水平显著升高(P＜0.05),血清中IL-6、IL-17和IL-1β水平均显著降低(P＜0.05);脑组织中LC3Ⅱ/LC3I、Beclin1、PINK1和Parkin蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05).结论 槲皮素可激活PINK1/Parkin信号通路,降低VD大鼠炎性细胞因子水平,减轻海马神经元炎症损伤,提高大鼠学习记忆能力,改善其痴呆症状.

背景 银杏叶提取物(GBE)能抑制慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道及全身炎性反应,改善气道重塑,但其具体作用机制尚不清楚.目的 探讨GBE通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路调控肺泡巨噬细胞自噬防治COPD的作用机制.方法 于2020年11月至2022年3月,选取90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、COPD模型组、GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组,每组15只.正常对照组第1、14天向气管内注入0.9％ 氯化钠溶液,其余时间进行正常饲养.COPD模型组、GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组和Taselisib组采用香烟熏吸联合气管内注入脂多糖(LPS)的方法构建COPD大鼠模型.GBE组于实验的第15～28天腹腔注射舒血宁注射液,比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组于实验的第29～42天分别给予Akt抑制剂比卡鲁胺、mTOR抑制剂雷帕霉素、PI3K抑制剂Taselisib进行干预.HE染色观察各组大鼠肺泡病理改变及气道重塑情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)与血清白介素6(IL-6)和白介素-8(IL-8)水平;显微镜下计数各组大鼠肺泡巨噬细胞数量;透射电镜观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的超微结构;蛋白免疫印迹法(WB)检测各组大鼠肺泡巨噬细胞自噬相关蛋白表达水平并计算微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值.结果 造模结束后各组大鼠数量为:正常对照组12只、COPD模型组11只、GBE组12只、比卡鲁胺组12只、雷帕霉素组12只、Taselisib组11只.HE染色结果显示,GBE组与各抑制剂组大鼠肺泡损伤程度较COPD模型组减轻;GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组肺平均内衬间隔(MLI)与平均肺泡面积(MAA)小于COPD模型组,平均肺泡数(MAN)大于COPD模型组(P<0.05);GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组支气管壁结构较COPD模型组完整.COPD模型组BALF与血清IL-6、IL-8水平高于其他各组(P<0.05).正常对照组巨噬细胞数量低于其他各组(P<0.05),COPD模型组巨噬细胞数量高于其他各组(P<0.05).透射电镜观察显示GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组肺泡巨噬细胞的自噬溶酶体较COPD模型组多.正常对照组的PI3Kp110α、Akt、p-Ak、mTOR、p-mTOR表达水平高于其他各组,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值低于其他各组(P<0.05);COPD模型组与GBE组、比卡鲁胺组、雷帕霉素组、Taselisib组比较,PI3Kp110α、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达水平升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(P<0.05).结论 GBE能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,维持COPD大鼠肺泡巨噬细胞的自噬功能,减轻巨噬细胞浸润,抑制炎性反应及肺泡破坏,改善气道重塑.