[目的]探究肺炎衣原体(C.pn)感染诱导血管平滑肌细胞(VSMC)焦亡及其可能机制.[方法]组织贴块法培养大鼠原代VSMC,利用C.pn感染VSMC模型,使用倒置相差显微镜观察C.pn感染后VSMC形态学的变化,试剂盒检测C.pn感染VSMC后乳酸脱氢酶(LDH)含量变化,Western blot实验检测GSDMD和Caspase-1的表达,串联质谱标签法定量蛋白质组学实验和GO富集分析检测线粒体氧化磷酸化和氧化呼吸链Complex相关蛋白的变化.[结果]与对照组相比,倒置相差显微镜下可见C.pn感染后VSMC膜外出现气泡状囊泡,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后LDH含量分别增加38.92％和79.54％(均P＜0.001),焦亡相关蛋白GSDMD表达增加1.74倍和 1.67 倍(均P＜0.001);C.pn 感染 VSMC 48 h 后 Caspase-1 表达(pro-Caspase-1)和活性(Caspase-1 p12/p10)分别增加2.69倍和3.47倍(均P＜0.001);质谱结果显示,C.pn感染VSMC后有20种差异表达的蛋白质富集在氧化磷酸化通路中,同时发现,Complex Ⅰ泛醌氧化还原酶铁硫蛋白4(NDUFS4)下降最为显著.进一步的Western blot实验结果显示,C.pn感染VSMC 36 h、48 h后NDUFS4的表达水平分别下降了 57.5％和57％(均P＜0.001).[结论]C.pn感染可能通过抑制NDUFS4表达影响线粒体功能,从而诱导VSMC焦亡.

目的 通过压力超负荷模型,探讨高血压条件下心房颤动易感性变化及分子机制.方法 12周龄雄性SD大鼠32只,随机分为对照组(n=15)和腹主动脉缩窄(AAC)组(简称模型组,n=17).模型组采用7号针头(外径0.7 mm)制备AAC模型,对照组不进行AAC,其余步骤相同.比较2组大鼠术后4周心脏超声学、血流动力学指标(每组取5只)和心脏电生理指标(P波离散度、心房间传导时间和左心房传导时间、心房有效不应期,每组取6只)及心房颤动易感性(心房颤动诱发率、持续时间、非自行终止性心房颤动发生率)的变化.提取对照组、模型组动物左心房组织mRNA,利用基因组测序方法筛选差异表达基因,并通过富集分析、蛋白互作网络分析,探索关键的分子靶点.结果 超声指标中,模型组左心房直径[(4.08±0.43)比(3.57±0.42) mm,t=2.376,P=0.030]、舒张期和收缩期室间隔厚度[(2.44±0.40)比(2.05±0.24) mm,t=2.167,P=0.046;(3.44±0.42)比(2.98±0.35) mm,t=2.304,P=0.035]高于对照组,左心室射血分数低于对照组[(61.36±8.62)％比(71.70±8.53)％,t=2.406,P=0.029].模型组左心室收缩压[162.5 (159.4～164.2)比132.6 (130.8～136.1) mm Hg,Z=-2.611,P=0.009]、主动脉收缩压[157.2(154.7～162.1)比127.1(126.1～129.9)mm Hg,Z=-2.617,P=0.009]、外周动脉收缩压[151.0(149.0～155.0)比124.0(120.0～127.0)mm Hg,Z=-3.134,P=0.002]高于对照组.模型组左心房传导时间、心房间传导时间高于对照组(均P＜0.05).模型组心房颤动持续时间长于对照组[15.00(12.75～18.00)比0(0～2.25)s,Z=-2.945,P=0.003].模型组在不同频率Burst刺激下,右心房刺激时心房颤动诱发率高于左心房刺激(13/60比3/60,x2 =7.212,P=0.007).模型组非自行终止性心房颤动发生率高于对照组(10％比0％,Fisher确切概率检验,P＜0.001).2组间P波离散度差异无统计学意义(P＞0.05).对照组、模型组左心房组织基因组测序筛选出5829个差异表达基因.京都基因与基因组百科全书(KEGG)、基因本体(GO)富集分析显示模型组线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ多重亚基组分和兰诺丁受体2(RyR2)、一氧化氮合酶1(NOS1)、磷酸二酯酶4D(PDE4D)、小窝蛋白1(Cav1)均显著下调(P校正＜0.05且log2差异倍数＜1);其中涉及线粒体、氧化应激的基因是Ndufs8、Ndufa 12.蛋白互作网络分析提示酶复合体Ⅰ的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)泛醌氧化还原酶铁-硫蛋白1、4、7、8及NADH泛醌氧化还原酶亚基a5、a12为关键节点.结论 0.7 mm ACC 4周能制备高血压相关的大鼠心房颤动易感模型;呼吸链酶复合体Ⅰ、Ⅱ关键组分和钙调控分子mRNA的低表达是模型组心房颤动易感性增加的主要分子机制.