目的 研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制.方法 采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白 1 基元 4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2 型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶 2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶 4(NOX4)的 mRNA 表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子 1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平.结果 温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P＜0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P＜0.05,P＜0.01),下调IκB-ζ(P＜0.05)和P65 蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13 以及ADAMTS4 mRNA表达(P＜0.01),抑制MMP13(P＜0.05,P＜0.01)和MMP3(P＜0.05)的蛋白表达.氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P＜0.01).温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4 的表达,降低细胞内糖酵解水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关.

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制.方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1 转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2 和TNF-α的表达水平.结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1 的表达水平显著上升(P＜0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P＜0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1 的表达水平(P＜0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 蛋白的相对表达量(P＜0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平(P＜0.05);与模型组相比,不同浓度的温经通络汤含药血清均表现出对HMGB1 和NF-κB信号通路的抑制效应,表现为HMGB1 与p-IκBα/IκBα和p-P65/P65 的蛋白表达水平下降(P＜0.05).结论 温经通络汤能够改善IL-1β诱导软骨细胞炎症,其作用机制可能与抑制HMGB1 介导NF-κB信号通路的活化相关.

目的 探索温经通络汤含药血清对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及潜在分子机制.方法 取传代培养的第2代小鼠软骨细胞,随机分为空白对照组(C组)、10ng/L IL-1β诱导模型组(M组)、10ng/L IL-1β+不同浓度含药血清组(10％、15％、20％),分别处理细胞24h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白印迹分析BAX、Bel-2、Caspase-3、Caspase-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT及AKT蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,10ng/L IL-1β可诱导软骨细胞的凋亡(P＜0.05);与模型组比,10％、15％及20％温经通络汤含药血清组软骨细胞的凋亡率显著下降,其中20％温经通络汤含药血清组效果最为显著(P＜0.05);与对照组相比,模型组BAX、Caspase-3、Caspase-9的表达明显增高(P＜0.05),Bcl-2、p-P13K、PI3K、p-AKT及AKT表达明显下降(P＜0.05);不同浓度的温经通络汤含药血清可降低BAX、Caspase-3、Caspase-9表达,增加Bel-2、p-PI3K、PI3K、p-AKT及AKT表达(P＜0.05).结论 温经通络汤可以通过激活PI3K/AKT信号通路而抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,从而起到预防骨性关节炎发生发展的作用.