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下调长链非编码RNA-钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1表达逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(KCNQ1OT1)在骨肉瘤顺铂(DDP)耐药发生中的作用及机制.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测KCNQ1OT1在亲代细胞及耐药细胞中表达.针对长链非编码RNA-KCNQ1OT1基因序列体外合成小干扰RNA (siRNA),脂质体法将siRNA转染至人骨肉瘤细胞,采用WST-1检测两组细胞顺铂半数抑制浓度(IC50),Transwell小室检测干扰KCNQ1OT1后对肿瘤迁徙及侵袭的影响情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测上皮-间质转化(EMT)相关分子的表达.所有结果采用GraphPad Prism 7.0(GraphPad Software Inc,La Jolla,CA)及SPSS 22.0软件(SPSS,Chicago,IL,USA)处理.Student's t检验进行统计分析.结果 骨肉瘤顺铂耐药细胞MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(17.960 ±0.153)、(7.725 ±0.183) μmol/L,显著高于亲代细胞的IC50值[(5.074±0.159)、(2.633 ±0.219) μmol/L,t=101.148、30.903,P<0.01].MG63顺铂耐药细胞株(MG63/DDP)和143B顺铂耐药细胞株(143B/DDP)中KCNQ1OT1的相对表达量分别为6.830±0.105、6.284±0.465,与亲代细胞比较(3.081±0.167,2.014±0.216),差异有统计学意义(t=22.917、11.722,P<0.01).干扰KCNQ1OT1表达后可抑制骨肉瘤细胞143B/DDP迁移及侵袭能力,WST-1检测干扰KCNQ1OT1后MG63/DDP及143B/DDP的IC50值分别为(8.363±0.089)、(3.947±0.093) μmol/L,与耐药细胞株比较,差异有统计学意义(t=-93.911、-31.878,P<0.01).耐药细胞比较亲代细胞钙黏附蛋白E (E-cadherin)表达下调,钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Slug表达上调,干扰KCNQ1OT1后,耐药细胞的E-cadherin表达上调,N-cadherin、Vimentin、Slug表达下调.结论 KCNQ1OT1可能通过调控EMT促进骨肉瘤耐药进程发生.
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编辑人员丨2023/8/6
