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兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR检测方法的建立
编辑人员丨2023/8/6
目的 建立荧光定量PCR检测兔斯氏艾美耳球虫的方法.方法 根据斯氏艾美耳球虫(内转录间隔区1)ITS1序列区设计特异性引物,构建重组质粒,并作为标准品绘制标准曲线,对建立的荧光定量PCR检测方法进行特异性、敏感性和重复性试验.结果 建立的荧光定量PCR能特异性地检测兔斯氏艾美耳球虫,且可检测到含一个卵囊DNA的样本.该方法的重复性较好,组内、组间重复试验的变异系数均小于2％.结论 建立了一种特异性好、敏感度高、可靠的检测兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR方法.
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编辑人员丨2023/8/6
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兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立
编辑人员丨2023/8/6
建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法.方法 根据E.stiedai的ITS 1-5.8sRNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法.结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5 μL,DNA的最优添加量是75 ng,环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8 μmol/L、1.6 μmol/L和0.15 μmol/L,在63℃反应1h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度.结论 建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路.
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编辑人员丨2023/8/6
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兔斯氏艾美耳球虫感染模型及巢式PCR诊断方法的建立
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立兔斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai,E.stiedai)感染模型和巢式PCR诊断方法.方法 利用剖检、显微镜观察、血液生化和病理组织学检查等方法对建立的兔E.stiedai模型进行鉴定.通过收集卵囊,提取E.stiedai的DNA,设计特异性引物,建立E.stiedai巢式PCR检测方法.结果 临床剖检:兔腹围明显增大,解剖见肝脏肿大,肝脏表面和实质布满白色及淡黄色结节,胆囊和胆管肿大,胆汁呈淡黄色.显微镜观察:虫卵大小为(31.72～38.43)μm x(18.10～22.69)μm.血液生化检查:球蛋白(GLOB)指标偏高,肌酐(CREA)和碱性磷酸酶(ALKP)指标偏低,其余检测指标均在参考值范围内.病理组织学检查:肝组织和胆管中见大量粉红色E.stiedai虫卵.巢式PCR检查:最低检测限为1个卵囊DNA样本和1.14 × 103拷贝数质粒,阴性对照和空白对照均未出现条带,重复性实验变异性系数＜ 5％.结论 成功构建兔E.stiedai感染模型,建立的巢式PCR诊断方法可扩增出E.stiedai的特异片段,敏感性强,重复性好.
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编辑人员丨2023/8/5
