目的:探讨Spondin-2(SPON2)基因沉默对人结直肠癌SW480细胞侵袭及上皮-间充质转化(EMT)能力的影响。方法:体外培养人结直肠癌SW480细胞，对细胞进行慢病毒转染，并将细胞分为对照组、阴性转染组和shSPON2转染组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组细胞中Spondin-2 mRNA的表达；细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养24、48、72 h后各组细胞增殖情况，Transwell法检测培养48 h后各组细胞侵袭情况；蛋白免疫印迹法检测培养48 h后各组细胞中蛋白细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、pERK1/2、含ETS域蛋白1(ELK-1)、pELK-1及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达。研究数据采用单因素方差分析进行比较。结果:shSPON2转染组SPON2 mRNA表达水平(0.43±0.04)低于对照组(1.00±0.05， t＝21.805， P<0.05)，低于阴性转染组(0.97±0.03， t＝26.454， P<0.05)。培养24、48、72 h后，3组间同一时间吸光度( A)值比较，差异有统计学意义( F＝27.982、31.052、28.484， P<0.05)。同一时间下，与对照组比较，shSPON2转染组细胞 A值降低，且低于阴性转染组( P<0.05)。shSPON2转染组SW480细胞侵袭数目[(55.93±11.24)个]低于对照组[(118.75±19.61)个， t＝6.808， P<0.05]，低于阴性转染组[(105.87±15.36)个， t＝6.427， P<0.05]。3组间SW480细胞蛋白pERK1/2、pELK-1表达水平比较，差异有统计学意义( F＝357.899、339.313， P<0.05)。与对照组比较，shSPON2转染组细胞蛋白pERK1/2、pELK-1表达降低，且低于阴性转染组( P<0.05)。3组间E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平比较，差异有统计学意义( F＝316.867、533.522、416.446， P<0.05)。与对照组比较，shSPON2转染组细胞蛋白E-cadherin表达升高，N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低( P<0.05)。 结论:SPON2基因沉默能够抑制SW480细胞增殖、侵袭，抑制EMT过程，可能与ERK/ELK-1信号通路的抑制有关。

目的:探讨微小RNA(miR)-19a-3p在乳腺癌细胞阿霉素耐药中的作用及其机制。方法:以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象，根据转染物的不同，将细胞分为对照组、miR-NC组(转染miR-19a-3p mimics阴性对照miR-NC)、miR-19a-3p mimics组(转染miR-19a-3p mimics)和miR-19a-3p mimics+si-转录因子ETS样蛋白3(ELK3)组[共转染miR-19a-3p mimics和ELK3小干扰RNA(siRNA)]。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-19a-3p的表达，RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中ELK3的mRNA和蛋白表达，Western blot法检测细胞中P-糖蛋白(P-gp，ABCB1)的表达，分别用不同浓度的阿霉素(0、5、10、25、50 nmol/L)处理各组细胞，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖能力，评价各组细胞对阿霉素的药物敏感性。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t法。 结果:miR-19a-3p mimics组miR-19a-3p表达(2.33±0.12比0.95±0.06， t＝18.20， P<0.01)明显高于miR-NC组，ELK3 mRNA表达(0.62±0.05比0.99±0.10， t＝6.01， P<0.01)、ELK3蛋白表达(0.32±0.02比0.56±0.02， t＝18.76， P<0.01)、ABCB1蛋白表达(0.33±0.02比0.48±0.02， t＝9.23， P<0.01)、半数抑制浓度(IC 50)值[(3.74±0.44) nmol/L比(9.01±0.40) nmol/L， t＝15.34， P<0.01]明显低于miR-NC组，差异均有统计学意义。miR-19a-3p mimics+si-ELK3组miR-19a-3p表达(3.48±0.38比2.33±0.12， t＝5.03， P<0.01)高于miR-19a-3p mimics组，ELK3 mRNA表达(0.32±0.02比0.62±0.05， t＝10.69， P<0.01)、ELK3蛋白表达(0.15±0.02比0.32±0.02， t＝10.05， P<0.01)、ABCB1蛋白表达(0.24±0.03比0.33±0.02， t＝4.61， P<0.01)、IC 50值[(1.67±0.24) nmol/L比(3.74±0.44) nmol/L， t＝7.16， P<0.01]低于miR-19a-3p mimics组，差异均有统计学意义。 结论:miR-19a-3p能够抑制乳腺癌细胞阿霉素耐药，其机制可能与miR-19a-3p抑制ELK3的表达有关。

目的:探讨索拉非尼对肿瘤细胞凋亡的影响以及涉及髓样细胞白血病-1(Mcl-1)下调的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测索拉非尼对肠嗜铬细胞(EC细胞，购自美国典型菌种保藏中心)增殖的影响，以确定索拉非尼的作用浓度和作用时间。将EC细胞分为4组：对照组、索拉非尼组、索拉非尼＋短发夹RNA以下调荧光素酶的质粒(shLuc)组和索拉非尼＋细胞外调解蛋白激酶下游作用底物磷酸化ets样基因-1(Elk-1)短发夹RNA(shElk-1)组。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、Elk-1、Mcl-1、蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白及mRNA的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析。结果:1、5和10 mol/L的索拉非尼作用后EC细胞的存活率分别为(67.42±5.08)%、(50.81±6.11)%和(38.49±5.41)%，显著低于0 mol/作用浓度(99.98±0.25)%( t1＝5.148， t5＝2.142， t10＝1.764， P值均<0.05)，差异有统计学意义。索拉非尼作用12、24和48 h后EC细胞的存活率分别为(65.41±4.61)%、(49.64±4.73)%和(42.49±5.02)%，显著低于0 h作用时间(99.99±0.18)%( t12＝4.624， t24＝1.856， t48＝1.751， P值均<0.05)；而与作用6 h比较，EC细胞的存活率差异无统计学意义( t6＝1.266， P>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞凋亡率显著增加( t＝12.235， P<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞凋亡率显著增加( t＝9.271， P<0.05)；各组间bcl-2相对表达量、bax相对表达量和bcl-2/bax比值比较，差异无统计学意义( Fbcl-2＝0.198， Fbax＝0.541， Fbcl-2/bax＝2.679， P值均>0.05)。与对照组比较，索拉非尼组细胞Elk-1蛋白的相对表达量差异无统计学意义( tElk-1蛋白＝1.426， P>0.05)，而Elk-1 mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低( tElk-1 mRNA＝2.266， tElk-1 mRNA＝0.045， tMcl-1蛋白＝2.774， tMcl-1 mRNA＝2.987， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Elk-1蛋白及mRNA、Mcl-1蛋白及mRNA的相对表达量显著降低( tElk-1蛋白＝5.340, tElk-1 mRNA＝6.240, tMcl-1蛋白＝6.248， tMcl-1 mRNA＝5.217， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。与对照组比较，索拉非尼组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低( tAkt蛋白＝3.579， tAkt mRNA＝3.641， tGSK3β蛋白＝2.694， tGSK3β mRNA＝3.091， P值均<0.05)；与索拉非尼组比较，索拉非尼＋shElk-1组细胞Akt蛋白及mRNA、GSK3β蛋白及mRNA的相对表达量显著降低( tAkt蛋白＝8.041， tAkt mRNA＝6.342， tGSK3β蛋白＝4.391， tGSK3β mRNA＝8.327， P值均<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:索拉非尼可促进EC细胞凋亡，其机制可能与抑制Elk-1/Mcl-1和Akt/GSK3β通路有关。

目的 观察子宫内膜癌(EC)组织中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、含ETS域转录因子Elk1(ELK1)表达变化,分析二者与上皮—间充质转化(EMT)及预后的关系.方法 EC患者90例,留取肿瘤组织与癌旁正常组织,采用免疫组化法检测GPX4、ELK1蛋白,采用实时荧光定量PCR法检测GPX4 mRNA、ELK1 mRNA及EMT相关基因[E-钙黏素(E-cad)、N-钙黏素(N-cad)、碱性螺旋—环—螺旋转录因子(TWIST)mRNA].采用Pearson相关分析法分析EC组织中GPX4 mRNA、ELK1 mRNA与E-cad mRNA、N-cad mRNA、TWIST mRNA表达的相关性.采用R软件分析癌症基因组图谱数据库中EC的RNA-seq数据,绘制Kaplan-Meier曲线,比较不同GPX4、ELK1 mRNA表达情况EC患者的预后.结果 EC组织中GPX4、ELK1蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05).EC组织中GPX4、ELK1、N-cad、TWIST mRNA表达高于癌旁组织,E-cad mRNA表达低于癌旁组织(P均<0.05).EC组织中GPX4 mRNA与ELK1 mRNA表达呈正相关;GPX4 mRNA、ELK1 mRNA表达与E-cad mRNA表达呈负相关,与N-cad mRNA、TWIST mRNA表达呈正相关(P均<0.05).EC组织中GPX4、ELK1 mRNA表达与FIGO分期、组织学分级和淋巴结转移有关,FIGO分期越高、组织学分级越高、有淋巴结转移者肿瘤组织中GPX4、ELK1 mRNA表达更高(P均<0.05).GPX4 mRNA高表达组、ELK1 mRNA高表达组5年总生存率分别低于低表达组(P均<0.05).结论 EC组织中GPX4、ELK1呈高表达,二者表达与EMT、患者预后有关,有望成为EC患者预后评估的标志物.

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Protein 1,HMGB1)对脂多糖(lipopo-lysaccharide,LPS)或白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)诱导人中耳腔上皮细胞(human middle ear epithelial cells,HMEEC)的炎症反应与凋亡的调控作用与机制.方法:培养 HMEEC 细胞系.将HMEEC分为对照组、LPS组、LPS联合短发夹RNA(shRNA)沉默质粒阴性对照处理组(LPS+shNC 组)、LPS联合shRNA沉默HMGB1 处理组(LPS+shHMGB1 组)、LPS 联合 p38-丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB202190 处理组(LPS+SB202190 组)、IL-17A 组、IL-17A+shNC 组、IL-17A+shHMGB1组、IL-17A+SB202190 组.酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测TNF-α、IL-1β和IL-6 的水平变化.用Western blot检测粘蛋白 5AC(mucoprotein 5AC,MUC5AC)、粘蛋白 8(mucoprotein 8,MUC8)、p38 MAPK、磷酸化的 p38 MAPK(p-p38 MAPK)、E26 样蛋白 1(E-twenty-six like 1 protein,ELK1)、B细胞淋巴瘤2 蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2),以及Bcl-2 相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达.流式细胞术检测细胞的凋亡.结果:与对照组比,LPS组或IL-17A组的 HMEEC 的凋亡率都增加,且 HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平升高,而 Bcl-2 的表达水平降低(均 P<0.05).与 LPS 组或 IL-17A 组比,LPS+shHMGB1 组或IL-17A+shHMGB1 组的凋亡率都降低,且 HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都减少,而Bcl-2 的表达水平升高(均P<0.05).与LPS 组或IL-17A组比,LPS+SB202190 组或 IL-17A+SB202190 组的的凋亡率都降低,MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都降低,而 Bcl-2 的表达水平升高(均 P<0.05)(均 P<0.05).结论:沉默HMGB1 通过抑制p38 MAPK信号通路减少 LPS 或 IL-17A 诱导的 HMEEC 的炎症与凋亡.

目的:探讨长链非编码 RNA核旁斑组装转录本 1(lncRNA NEAT1)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的分子机制和功能.方法:收集健康人和动脉粥样硬化(AS)病人血液标本并通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清中 lncRNA NEAT1、微小 RNA-424-5p(miR-424-5p)和 ETS域蛋白 4(ELK4)mRNA表达水平.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4表达情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和膜联蛋白 V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测 HUVEC细胞增殖活力和凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β含量、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)和C反应蛋白(CRP)水平;采用双荧光素酶报告基因测定 lncRNA NEAT1、miR-424-5p和 ELK4 之间的靶向相互作用.进行动物实验以评估 lncRNA NEAT1在体内 AS进展中的作用.结果:lncRNA NEAT1在 AS病人血清和ox-LDL诱导的 HUVEC中显著上调(P<0.05).lncRNA NEAT1的沉默可削弱 ox-LDL引发的细胞毒性,降低 Lp-PLA2和CRP水平,并减少ApoE-/-小鼠的脂质异常分泌(P<0.05).miR-424-5p是 lncRNA NEAT1在调节 ox-LDL诱导的 HUVEC损伤中的功能介质,ELK4是miR-424-5p的直接靶标(P<0.05).miR-424-5p的抑制或ELK4的过表达逆转了lncRNA NEAT1沉默对ox-LDL诱导的HUVEC细胞损伤的影响(P<0.05).结论:沉默lncRNA NEAT1可通过调控 miR-424-5p/ELK4轴保护 HUVEC免受 ox-LDL触发的细胞毒性,降低 Lp-PLA2和 CRP水平.

目的:探讨转录因子ELK3（ELK3）在胃癌组织和癌旁组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2019年1月至2021年6月行手术治疗的60例胃癌患者癌组织和对应癌旁组织（距肿瘤边缘3~5?cm）标本进行研究。采用免疫组织化学染色法检测胃癌组织及癌旁组织中ELK3表达情况。采用SPSS 21.0软件分析数据，计数资料以例表示，组间比较采用χ2检验；Kaplan-Meier生存函数分析ELK3与患者预后的关系；Cox回归模型分析影响胃癌患者预后生存的危险因素。P<0.05表示差异有统计学意义。结果:胃癌组织中ELK3阳性表达率显著高于癌旁组织（χ2=11.422，P=0.001）；胃癌组织中ELK3阳性表达率与淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度、病理分型显著相关（P<0.05）；60例胃癌患者均获得随访，中位随访时间25个月。ELK3阳性组患者累积总生存率显著低于ELK3阴性组（Log-Rank χ2=4.192，P=0.041）；淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度、神经侵犯、术后放化疗、ELK3阳性表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素（P<0.05）。结论:胃癌组织中ELK3显著阳性表达，与淋巴结转移、肿瘤分期、分化程度、病理分型等病理特征及患者预后关系密切，是影响胃癌患者预后的独立危险因素，可能成为胃癌预后评估的潜在生物标志物。

2023年10月2日,上海交通大学医学院附属新华医院杜鹏、刘辰莹联合美国希望之城国家医疗中心(Beckman Research Institute of City of Hope Comprehensive Cancer Center)Ajay Goel 课题组在 Advanced Science 期刊在线发表题目为 ELK4 promotes colorectal cancer progression by activating the neoangiogenic factor LRG1 in a noncanonical SP1/3-dependent manner的研究论文.该研究通过基于基因组学和蛋白质组学的方法,发现转录因子ELK4与转录因子SP1/SP3相互作用,以血清应答因子(serum response factor,SRF)非依赖性方式调控病理性血管新生因子亮氨酸丰富α2-糖蛋白1(leucine-rich α-2 glycoprotein 1,LRG1)基因转录,促进结直肠癌的发生和进展;研究结果为结直肠癌的靶向治疗提供了新的作用靶点.研究人员还基于ELK4-SP1/3转录调控的下游靶基因集(ELK4-SP1/3 complex-regulated gene set,ESGS),开发了结直肠癌预后预测模型,发现其对结直肠癌患者预后判断具有较好的准确性.

目的 研究糖尿病大鼠额叶神经细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK1/2)、底物磷酸化ets样基因1(Elk-1)的磷酸化表达状态,以探讨糖尿病脑病的发病机制.方法 应用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导制备糖尿病大鼠模型,通过组织学、免疫组化染色,对比观察糖尿病大鼠额叶脑组织的病理改变及神经细胞中磷酸化ERK1/2及下游作用底物Phospho-Elk-1的表达情况.结果 制模后第4周和第8周,糖尿病组大鼠额叶脑皮质神经细胞中磷酸化-ERK1/2以及大鼠额叶脑皮质、灰质核团神经细胞中的磷酸化-Elk-1的阳性率均高于同期对照组以及第3天、第2周糖尿病组大鼠(P<0.05),糖尿病组大鼠第8周额叶脑皮质核团神经细胞中磷酸化ERK1/2和磷酸化Elk-1表达的阳性率高于第4周(P<0.05).制模后第2、4、8周的糖尿病组大鼠的额叶脑灰质神经细胞中磷酸化ERK1/2阳性率均高于同期对照组和制模后第3天(P<0.05),且随着制模时间的延长,磷酸化ERK1/2阳性率逐渐增高(P<0.05).结论 糖尿病大鼠在制模后第4、8周额叶神经细胞中存在ERK1/2信号转导通路的异常激活.

目的:研究TGF-β1对牙髓细胞增殖、分化和ERK/MAPK信号通路的影响.方法:采用Western blot检测TGF-β1在急性牙髓组织、慢性牙髓组织和正常牙髓组织中的表达,然后采用Ⅰ型胶原酶消化分离培养牙髓细胞,不同浓度的TGF-β1处理牙髓细胞7d,CCK-8法检测细胞增殖.采用TGF-β1(5.0μg/L)和U0126(10μmol/L)分别单独或联合作用于牙髓细胞7d,CKK-8法检测细胞增殖;在第1、3、5和7天检测碱性磷酸化酶活性;第7天时Western blot检测ERK/MAPK信号通路中的关键蛋白PPAR-γ和ELK-1水平.结果:TGF-β1在牙髓炎组织中低表达,且TGF-β1浓度在0.1~5.0μg/L时,从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞的增殖(P<0.05),具有时间和剂量依赖效应.U0126能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸化酶的活性,具有时间依赖性.TGF-β1能够促进PPAR-γ和ELK-1蛋白的表达,而U0126能够降低TGF-β1对PPAR-γ和ELK-1蛋白表达的促进作用.结论:TGF-β1可以促进牙髓细胞的增殖和分化,且具有时间和浓度依赖效应,其作用机制可能与ERK/MAPK信号通路相关.